封入体の回収
大腸菌で発現させた不溶性封入体を放出させ、遠心・洗浄で回収する。過破砕によるデブリ微細化を抑える条件で運転する。
- 封入体放出
- 過破砕回避
高圧ホモジナイザーは、大腸菌や酵母などの菌体懸濁液を高圧で加圧し、狭い隙間で急減圧・剪断・キャビテーションを与えて細胞壁を破砕する装置です。封入体や可溶性タンパク質、プラスミドなどの細胞内産物を放出させる回収・破砕工程の中核で、圧力・パス回数・スケール・冷却が選定軸になります。
高圧ホモジナイザーは、ポンプで菌体懸濁液を数百〜2000 bar超まで加圧し、ホモジナイジングバルブ(インタラクションチャンバ)の微小隙間を通過させます。急激な減圧、高剪断、キャビテーションが複合的に作用して細胞壁を物理的に破壊し、封入体や可溶性タンパク質を液中へ放出させます。化学的・酵素的破砕と異なり添加物を残さず、大スケールでの再現性に優れます。
破砕効率は主に運転圧力とパス回数で決まり、菌種・細胞濃度・封入体の有無で最適点が変わります。圧力を上げパス回数を増やすほど破砕率は上がりますが、目的タンパク質の変性や微細化したデブリによる後段精製(清澄化・ろ過)の負荷増大とのトレードオフになります。封入体回収では過破砕を避け、可溶性タンパクでは十分な破砕率を狙うなど、目的で条件設計を変えます。
断熱圧縮により1000 barあたり概ね2〜3℃の温度上昇が起こるため、入口の予冷と出口の熱交換器による冷却が必須です。スケールアップではバルブ形状と圧力を固定しパス回数や流量で合わせる設計が基本で、ラボ機(数十mL)からパイロット・製造機(数百L/h)まで同一原理でスケール相関を取りやすい点が特長です。
菌体懸濁液を予冷し、設定圧力で1回または複数回パスさせて破砕し、出口で冷却してから次工程へ送ります。
菌体培養後のハーベスト後、細胞内産物を放出させる破砕工程で使われます。
大腸菌で発現させた不溶性封入体を放出させ、遠心・洗浄で回収する。過破砕によるデブリ微細化を抑える条件で運転する。
ペリプラズムや細胞質の可溶性タンパクを放出させる。十分な破砕率を確保しつつ目的タンパクの変性・発熱を抑える。
大腸菌からのプラスミド回収やmRNA原料用テンプレートの前処理で、菌体破砕の選択肢として使われる(剪断による分解に注意)。
発酵で得た菌体から目的物を放出させる破砕条件(圧力・パス回数)の最適化やスケールアップ検討に使われる。
微生物(大腸菌・酵母)を宿主とする生産系で関連度が高い装置です。