大腸菌製造 基準工程マップ

株の均一性がロット間の発現量と不純物プロファイルのぶれを左右する。

凍結セルバンクから生産槽へ十分量の活性菌体を供給する標準の前段拡大

高密度培養前に無菌の培地・流加フィードを供給し汚染を防ぐ標準前工程

酢酸蓄積を抑えつつ菌体密度を上げ、目的物の総量を最大化する。

封入体を壊しすぎず菌体内の目的物を取り出せるかが後工程の鍵。

可溶化前の封入体純度が後の巻き直しの成否を左右する。

凝集を防ぎ正しいジスルフィドを作り活性を取り戻す律速工程。

希釈リフォールド液の大容量を凝集体除去・濃縮し捕捉クロマトに供する

大量の不純物を一度に削る最初の濃縮・精製ステップ。

凝集体・断片と内毒素を削り最終純度と安全性を決める。

目的物を必要濃度まで濃縮し保存用バッファへ交換する最終仕上げ。

微生物を除き無菌の注射剤に仕上げる最後の安全性の関門。

目的物の量を数値化し工程管理とロット規格の基本データとする。

免疫原性に直結する凝集体・断片の混入量を別の方法で評価する。

脱アミドや切断による電荷変化を捉え製造のばらつきを管理する。

分子量と配列・修飾を精密確認し目的物であることを保証する。

正しく折りたたまれ高次構造が保たれているかが効力を左右する。

効く力の有無を機能で測り製品成立の可否を決める。

E. coli由来混入タンパク質は微量でも免疫原性・安定性に影響する。

宿主DNA残量は規制で上限が定められた安全性必須項目。