細胞株開発・クローン選抜
単一細胞播種、クローン増殖、スクリーニング、継代培養に使われる。
- クローン選抜
Tフラスコ・培養プレートは、細胞を静置培養するための培養容器です。Tフラスコは、T25、T75、T175などの培養面積を持つフラスコ型の容器で、細胞の維持培養、融解後の回復培養、継代、初期拡大培養に使われます。培養プレートは、6ウェル、12ウェル、24ウェル、96ウェル、384ウェルなどのフォーマットがあり、細胞株開発、クローン選抜、スクリーニング、細胞ベースアッセイ、画像解析に使われます。
Tフラスコ・培養プレートは、細胞を一定の培養面積で維持・増殖・評価するために使われます。Tフラスコは、比較的少量から中程度の細胞を静置培養するために使いやすく、凍結細胞の融解後回復、継代培養、候補クローンの初期拡大に向いています。
培養プレートは、多検体処理や条件比較に向いており、単一細胞播種、クローン性確認、増殖観察、ELISA前処理、細胞ベースアッセイ、トランスフェクション条件検討、薬剤評価などに使われます。
基本的には、細胞懸濁液をTフラスコまたは培養プレートに播種し、CO2インキュベーター内で培養します。
Tフラスコと培養プレートは、どちらも静置培養に使われますが、向いている用途が異なります。
Tフラスコは「細胞を増やす容器」、培養プレートは「条件を並べて評価する容器」と考えると整理しやすくなります。
継代、維持培養、初期拡大
条件検討、スクリーニング、解析
T25、T75、T175など
6、12、24、48、96、384ウェルなど
少〜中
中〜多
手作業で扱いやすい
多検体処理に向く
細胞回収、増殖確認
プレートリーダー、画像解析、顕微鏡観察
限定的
自動分注・自動観察と相性がよい
融解後回復、継代、拡大
単一細胞播種、クローン選抜、アッセイ
| 項目 | Tフラスコ | シェイクフラスコ |
|---|---|---|
| 培養方式 | 静置培養 | 振とう培養 |
| 主な細胞 | 接着細胞、静置培養、初期回復 | 浮遊CHO、HEK293、微生物など |
| 酸素供給 | 培地表面からの拡散 | 振とうによる気液混合 |
| スケールアップ | 静置系・プレート系に接続 | 小型バイオリアクターへ接続しやすい |
| 主な用途 | 回復培養、継代、クローン培養 | シードトレイン、浮遊細胞拡大 |
| 注意点 | 培養面積、接着、コンフルエンス | 振とう速度、液量、酸素移動、せん断 |
| 培養タイプ | 使い方 | 注意点 |
|---|---|---|
| 接着細胞 | 表面処理済みのフラスコ・プレートに播種する | 接着性、表面処理、コンフルエンス管理が重要 |
| 浮遊細胞 | 低接着容器や通常容器で静置培養する場合がある | 細胞沈降、混合不足、酸素供給に注意 |
| 3D培養 | 超低接着プレートやスフェロイドプレートを使う | ウェル形状、低接着処理、画像解析適性が重要 |
| 単一細胞培養 | 96/384ウェルプレートに単一細胞を播種する | ウェル観察、蒸発、エッジ効果、クローン性確認が重要 |
| 細胞ベースアッセイ | 黒色・白色・透明プレートを使い分ける | 蛍光、発光、吸光、背景シグナルに注意 |
| タイプ | 内容 | 向く用途 |
|---|---|---|
| Tフラスコ | T25、T75、T175などの静置培養容器 | 継代、回復培養、初期拡大 |
| マルチウェルプレート | 6、12、24、48、96、384ウェル | 条件検討、スクリーニング、単一細胞培養 |
| 接着細胞用表面処理品 | TC treated、CellBIND、Nunclon Deltaなど | 接着細胞、初代細胞、低接着性細胞 |
| 未処理プレート | 表面処理なし | 浮遊細胞、特殊コーティング |
| 低接着・超低接着プレート | 細胞接着を抑える表面 | スフェロイド、浮遊細胞、3D培養 |
| コラーゲン/ポリリジン処理品 | 細胞接着を補助する表面 | 初代細胞、神経細胞、接着しにくい細胞 |
| 黒色プレート | 蛍光測定の背景を抑える | 蛍光アッセイ、イメージング |
| 白色プレート | 発光シグナルを高める | 発光アッセイ、ルシフェラーゼ |
| 透明底プレート | 顕微鏡観察や画像解析に向く | ライブセルイメージング、高コンテンツ解析 |
| 自動化対応プレート | SBS規格、バーコード、ロボット適性 | 自動分注、HTS、クローン選抜 |
Tフラスコ・培養プレートは、細胞を扱う多くの工程で横断的に使われます。
単一細胞播種、クローン増殖、スクリーニング、継代培養に使われる。
トランスフェクション後培養、選択培養、候補クローン維持に使われる。
96/384ウェルプレートで単一細胞培養を行う。
プレート上でクローンの増殖や形態を観察する。
培養上清を回収し、ELISA、BLI、Protein A HPLCなどへつなぐ。
細胞数、生存率、形態、代謝、増殖曲線を確認する。
融解後回復、評価用培養、凍結前の細胞確認に使われる。
WCB融解後の回復培養、初期拡大培養に使われる。
解凍後の細胞をCO2インキュベーターで回復させる。
Tフラスコからシェイクフラスコや小型培養装置へ移行する。
原料細胞、MSC、iPS細胞、分化細胞の研究・開発培養に使われる。
細胞ベースアッセイ、毒性評価、薬効評価、バイオアッセイで使われる。
Tフラスコ・培養プレートは、細胞を使うほぼすべてのモダリティーで使われます。