工程1：セルバンク調製・凍結保存
MCB/WCBの二層保存と緩慢凍結・気相液窒素保管が製造の再現性を担保する起点
基準法GMP対応の MCB/WCB 二層式構築詳細 →
Standard Process Map遺伝子治療
AAVベクター製造 基準工程マップ
この基準工程マップは、AAVベクターの製造と分析を上流→下流（精製）→製剤・充填→品質特性解析の順に整理しています。最適な手法は血清型や産生細胞などの条件で変わるため、空・フルカプシド分離をはじめ各工程に代替・補完法も併記しています。
製法の条件で切り替える
◇の付いた5工程は、この条件で基準法が変わります。
全体像
工程名を押すと、その工程の説明へ移ります。工程を押すと、その場で詳しい説明が開きます。◇は条件で基準法が変わる工程です。
原料（別マップ）
製法の条件で切り替える
◇の付いた5工程は、この条件で基準法が変わります。
細胞・産生（7工程）
工程2：セルバンク特性解析・安全性試験
無菌・マイコ・同定・外来性ウイルス・遺伝安定性で細胞バンクの適格性を裏づける
基準法ICH Q5D に基づく MCB/WCB 特性解析パッケージ詳細 →
工程3：原料プラスミド受入・適格性確認
プラスミドは製品DNAそのものになる出発材料で品質が力価と安全性を直接左右するため
基準法アガロースゲル電気泳動／CGEによるトポロジー
工程4：シードトレイン・N-1スケールアップ
トランスフェクション直前の生存率・密度・細胞齢をそろえ生産槽へ供給するシードトレイン
基準法化学的定義詳細 →
工程5：産生プラットフォーム選定
細胞基質×ゲノム導入方式の選択が精製設計・収量・COGS・規制説明を一括で規定する
基準法浮遊馴化HEK293細胞の無血清浮遊培養＋一過性トリプルトランスフェクション詳細 →
工程6：トランスフェクション基準法
PEIによる3プラスミド導入の効率と複合体設計が収量とエンプティ／フル比を左右する中心工程
基準法浮遊HEK293詳細 →
工程7：灌流・プロセスインテンシフィケーション
灌流と細胞保持で高密度を維持し同容積から収量を引き上げる強化アップストリーム
基準法撹拌槽バイオリアクターを灌流モードで運転し、細胞保持デバイス詳細 →
精製（6工程）
工程8：ハーベスト・細胞溶解
細胞内に蓄積したAAVを界面活性剤溶解で取り出す、回収率を左右する律速工程
基準法界面活性剤（非イオン性サーファクタント）による化学的細胞溶解詳細 →
工程9：ヌクレアーゼ処理・清澄化
ヌクレアーゼでhost DNAを切り粘度を下げ、2段デプスろ過で捕捉前の負荷を除く
基準法エンドヌクレアーゼ消化＋2段（一次・二次）デプスろ過による清澄化詳細 →
工程10：キャプチャー精製
◇ 分岐アフィニティ捕捉で微量カプシドを純度90%超に濃縮し後段AEX・TFFの負荷を下げる
基準法ラクダ科単一ドメイン抗体フラグメント詳細 →
改変カプシドでは
アフィニティ捕捉（AAVX）― 改変カプシドでは結合検証が前提
工程11：空/実分離ポリッシング
◇ 分岐封入DNAの微小電荷差をAEX塩グラジエントで使い、フルカプシドを濃縮し空を除くポリッシング工程
基準法陰イオン交換クロマトグラフィー(AEX)による塩グラジエント溶出での空/フルカプシド分離詳細 →
改変カプシドでは
改変で表面電荷が変わるためAEXの溶出条件を都度再最適化する
工程12：UF/DF・0.2µmろ過
UF/DFでAAVを膜上に残し濃縮と製剤バッファ置換を同時に行い0.2µmろ過で原薬化
基準法シングルパス／循環式TFFによるUF/DF（限外ろ過・ダイアフィルトレーション）での濃縮・バッファ交換詳細 →
工程13：最終除菌ろ過
低濃度AAVの膜吸着で力価30〜40%を失うため低吸着膜で無菌性とロス抑制を両立
基準法0.22µm滅菌グレード・低タンパク吸着膜による滅菌ろ過詳細 →
製剤・充填（4工程）
工程14：フィル＆フィニッシュ・無菌充填
除菌ろ過後の製剤を実際に最終容器へ無菌で充填・閉塞しなければ製品が完成しないため
基準法シングルユースアイソレータ内でぜん動ポンプ式無菌充填・打栓を行い、別チャンバで巻締するシングルユース充填ライン
工程15：製剤・処方設計
ポロキサマー188と高イオン強度・糖で容器吸着90%損失と血清型依存の凝集を抑える処方
基準法非イオン界面活性剤ポロキサマー188詳細 →
工程16：原薬の凍結保存
−60℃以下保存に界面活性剤・糖・低吸着容器を組み凍結ストレスのカプシド破裂を防ぐ
基準法-60〜-80℃の超低温フリーザー（メカニカル式）での凍結保存詳細 →
工程17：コールドチェーン輸送
出荷から投与まで−60℃以下を維持し凍結融解によるカプシド破裂・凝集・力価低下を防ぐ
基準法ドライアイス（固体CO2、約-78.5℃）梱包による-60℃以下維持輸送詳細 →
装置温度データロガー
キャラクタリゼーション（13工程）
工程18：ベクターゲノム力価／ddPCR
ddPCRでvgを絶対定量し用量・エンプティ／フル比・ロット均一性を決める全CQAの起点となる分母
基準法デジタルPCR（ddPCR）による絶対定量詳細 →
工程19：総カプシド力価・実/空比／SV-AUC
◇ 分岐SV-AUCで総粒子数と空カプシド割合を測りvg/cp比という品質指標を押さえる工程
基準法沈降速度分析超遠心（SV-AUC）詳細 →
装置分析超遠心
改変カプシドでは
マスフォトメトリー／SEC-MALS等の抗体非依存法（改変ではELISA不適）
工程20：空/実/部分カプシド比／SV-AUC
沈降係数差で空・部分・実を分け、力価・用量設計・安全性を決めるCQAを絶対定量
基準法沈降速度分析超遠心詳細 →
装置分析超遠心装置
工程21：ゲノム完全性／CGE-LIF
封入ゲノムの全長性をCGE-LIFで評価、切断種が発現不全と免疫リスクを生むため
基準法変性条件下キャピラリーゲル電気泳動＋レーザー誘起蛍光検出詳細 →
装置キャピラリー電気泳動試薬ベンゾナーゼ
工程22：VP1:VP2:VP3比／CE-SDS
CE-SDSでVP1:VP2:VP3比を測り、カプシド組立とトランスダクション効率を監視する
基準法CE-SDS（ドデシル硫酸ナトリウム キャピラリー電気泳動、UV吸収検出）詳細 →
工程23：カプシド同定・PTM解析／LC-MS
◇ 分岐LC-MS/MSで血清型VP配列の同一性と導入効率に効くPTMを部位ごとに特性解析する
基準法LC-MS/MS詳細 →
改変カプシドでは
LC-MS/MSペプチドマッピング＋インタクト/サブユニットMS（改変部位の配列・質量を確認）
工程24：感染価・ポテンシー試験
◇ 分岐実際に感染し発現する力を測り、vg/IU比で製剤の品質と一貫性を示す必須項目
基準法感染価：TCID50 / qPCR・ddPCRエンドポイント法（感染後ゲノムコピー測定）詳細 →
改変カプシドでは
改変で指向性が変わるため、ポテンシーの細胞モデルを標的に合わせて選び直す
工程25：複製能AAV(rcAAV)検出
複製能を持つAAVの混入は患者安全に直結するためFDA等が必須とする安全性試験だから
基準法許容細胞（HeLa/HEK293系）にヘルパーアデノウイルス存在下で検体を接種し、継代で増幅したのち rep／cap 特異的qPCRで検出する
工程26：凝集体・粒子径評価／SEC-MALS
SEC-MALSで単量体・二量体・凝集体を分け定量、凝集が効果と免疫・安全性に直結
基準法SEC-MALS（サイズ排除クロマトグラフィー＋多角度光散乱）詳細 →
工程27：粒子数・サブビジブル管理
SEC-MALSで絶対粒子数を、光遮蔽法でサブビジブルをUSP規格に対し同時に管理する
基準法SEC-MALS（凝集体・分子量・粒子数推算の別の方法）詳細 →
工程28：封入不純物DNA定量
DNase耐性の封入DNAをqPCRで定量、外側分解できず投与されるため安全性CQAとなる
基準法DNase処理後の qPCR / ddPCR による封入DNA定量詳細 →
工程29：残存宿主由来不純物：DNA/HCP
残存host DNA・プラスミド・HCPを定量し発がん・免疫リスクをFDA/WHO規格内に抑える
基準法残存宿主細胞DNA詳細 →
工程30：残存プラスミドDNA定量
封入・遊離した残存プラスミドは宿主DNAと別に管理すべき製造由来の遺伝毒性不純物だから
基準法DNase処理の有無を比較したqPCR／ddPCRでカプシド内封入プラスミドと遊離プラスミドを区別し、rep・cap・KanR等を標的に定量する
公開情報にもとづく一般的な整理です。実際の構成は条件により異なります。