細胞株開発・クローン選抜
遺伝子導入確認、コピー数確認、発現確認に使われる。
主な用途
- 導入確認
関連解析装置・技術
リアルタイムPCR装置
リアルタイムPCR装置は、PCR反応中に増幅されるDNAを蛍光シグナルとしてリアルタイムに検出し、目的遺伝子や核酸量を定量する装置です。Ct値（Cq値）から核酸量を推定でき、マイコプラズマ試験や残存DNA定量などで専用キットと組み合わせて使われます。
- 分類
- 関連解析装置・技術
- 主な用途
- qPCR / 核酸定量 / マイコプラズマ/残存DNA / セルバンク品質試験
- 関連モダリティ
- 抗体医薬 / ADC / 二重特異性抗体 / Fc融合・組換えタンパク質 / AAV / レンチウイルス / プラスミドDNA / 細胞治療 / iPS細胞・幹細胞由来製品 / ワクチン / mRNA医薬・LNP
- 代表メーカー
- Thermo Fisher Scientific / Applied Biosystems・Bio-Rad・Roche Diagnostics・QIAGEN ほか計17社
- 関連キーワード
- マイコプラズマ / 残存DNA / ウイルス安全性 / 細胞同一性 / セルバンク / デジタルPCR
用途・特徴
リアルタイムPCR装置は、DNAやRNA由来の核酸を高感度に検出・定量するために使われます。バイオプロセスでは、品質試験、汚染確認、工程管理、原材料確認、セルバンク評価、ウイルス安全性評価など複数の場面で利用されます。
特にマイコプラズマ試験や残存DNA定量では、リアルタイムPCR装置と専用キットを組み合わせ、短時間で結果が得られることが大きな特徴です。
Point
- PCR増幅をリアルタイムに検出できる
- DNAやRNA由来の核酸を高感度に定量できる
- マイコプラズマ試験、残存DNA試験、ウイルス核酸検出に使われる
- セルバンクやGMP品質試験で重要
- TaqManプローブ法、SYBR Green法などに対応する
- 96ウェル、384ウェル、ローター型などの装置がある
使用方法
基本的には、サンプルから核酸を抽出し、PCR反応液を調製して、リアルタイムPCR装置で測定します。
1サンプルを採取する
2DNA／RNAを抽出する
3必要に応じて逆転写を行う
4プライマー・プローブ・マスターミックスを調製する
5プレート／チューブに分注する
6温度サイクルと蛍光検出を行う
7Ct値・標準曲線・陽性/陰性判定を確認する
実際の条件は、試験対象、サンプル前処理、抽出方法、検出キット、反応系、装置フォーマット、GMP対応、解析ソフト、バリデーション要件によって変わります。
通常PCRとの違いは？
どちらもPCR反応を行いますが、検出方法と用途が異なります。
結論
通常PCRは「増えたかを見る」用途に向き、リアルタイムPCRは「どれくらいあるかを測る」用途に向きます。
主な目的
DNAを増幅して有無を確認する
DNA増幅をリアルタイムに検出・定量する
検出タイミング
反応後
反応中
主な検出方法
電気泳動、蛍光染色など
蛍光シグナル検出
定量性
限定的
高い
主な用途
クローニング確認、遺伝子確認
マイコプラズマ、残存DNA、ウイルス核酸、遺伝子発現
装置
サーマルサイクラー
リアルタイムPCR装置
デジタルPCRとの違い
| 項目 | リアルタイムPCR | デジタルPCR |
|---|---|---|
| 定量方法 | Ct値と標準曲線から推定 | 反応区画の陽性/陰性数から絶対定量 |
| 標準曲線 | 基本的に必要 | 不要な場合が多い |
| 感度 | 高い | 非常に高い |
| 主な用途 | 汚染確認、残存DNA、遺伝子発現、工程管理 | コピー数、AAV力価、低頻度変異、微量核酸 |
| コスト | 比較的導入しやすい | 装置・消耗品コストが高め |
主な検出方式
| 方式 | 内容 | 向く用途 |
|---|---|---|
| TaqManプローブ法 | 配列特異的な蛍光プローブを使う方法 | マイコプラズマ、残存DNA、ウイルス核酸、GMP試験 |
| SYBR Green法 | 二本鎖DNAに結合する蛍光色素を使う方法 | 遺伝子発現、研究用途、スクリーニング |
| HRM解析 | 融解曲線の違いで変異や配列差を検出する方法 | SNP解析、変異確認、遺伝子型判定 |
| RT-qPCR | RNAを逆転写してPCRで定量する方法 | RNAウイルス、遺伝子発現、mRNA関連評価 |
| マルチプレックスqPCR | 複数ターゲットを同時検出する方法 | 汚染確認、ウイルス検出、内部標準付き試験 |
選定ポイント
フォーマット96ウェル、384ウェル、ローター型、チューブ型に対応するか
検出チャンネルFAM、VIC、ROX、Cy5など必要な蛍光色素に対応するか
感度・再現性低コピー検出や標準曲線の再現性が十分か
ソフトウェアCt解析、標準曲線、融解曲線、マルチプレックス解析に対応するか
GMP対応監査証跡、ユーザー権限、電子署名、21 CFR Part 11対応の有無
キット適合性マイコプラズマ・残存DNAキット、ウイルス検出系と組み合わせられるか
自動化連携分注装置、LIMS、ロボットと接続できるか
使用される工程
リアルタイムPCR装置は、核酸検出や品質確認が必要な工程で広く使われます。
セルバンク
マイコプラズマ試験、細胞同一性確認、ウイルス安全性試験に関係する。
主な用途
- マイコプラズマ
- 同一性
本培養・ハーベスト
マイコプラズマ、ウイルス核酸、工程中サンプルの確認に関係する。
主な用途
- 工程内確認
下流精製・UF/DF
残存宿主細胞DNAの確認に使われる。
主な用途
- 残存DNA
品質評価・分析
残存DNA、マイコプラズマ、ウイルス核酸、遺伝子発現解析に使われる。
主な用途
- 品質試験
GMP品質管理
規格試験、工程内管理、出荷試験、逸脱調査に使われる。
主な用途
- 出荷試験
各工程で広く使われる基準法・装置・試薬は、各モダリティの工程マップで製造の流れに沿って確認できます。
使用されるモダリティー
リアルタイムPCR装置は、核酸検出を必要とする多くのモダリティーで使われます。
ADC
関連度高
抗体原薬製造CHO細胞残存DNA
抗体部分の製造細胞・品質確認で使われる。
Fc融合・組換えタンパク質
関連度高
CHOHEK293残存DNA
産生細胞や原薬の品質確認に使われる。
AAV
関連度高
ゲノム力価残存DNARCA確認
qPCR/ddPCRと組み合わせてベクター品質評価に使われる。
レンチウイルス
関連度高
ベクターコピーRCL確認
ウイルスベクター製造の品質確認に使われる。
プラスミドDNA
関連度高
コピー数残存宿主DNA
プラスミド製造や原材料確認に関係する。
ワクチン
関連度高
ウイルス核酸細胞基材原材料確認
品質試験や工程管理に使われる。
mRNA医薬・LNP
関連度中〜高
原材料残存DNA評価細胞
品質確認・原材料確認で関係する。
メーカー製品
リアルタイムPCR装置（7）
Thermo Fisher Scientific / Applied BiosystemsQuantStudio Real-Time PCR Systemsマイコプラズマ検出、残存DNA、遺伝子発現、ウイルス核酸検出など幅広いqPCR用途で使われるシリーズ。公式URL 国内取扱 サーモフィッシャーサイエンティフィック（日本法人）
Bio-RadCFX Opus / CFX96 / CFX384熱性能・光学系・接続性を特徴とするリアルタイムPCRシステム。遺伝子発現、病原体検出、品質確認に使われる。公式URL 国内取扱 バイオ・ラッド ラボラトリーズ（日本法人）
Roche DiagnosticsLightCycler 480 Instrument II / LightCycler 96プレートベースのリアルタイムPCR装置。96/384ウェルに対応し、核酸検出・定量に使われる。公式URL
製薬・品質試験向けシステム／検出キット（5）
Thermo Fisher Scientific / Applied BiosystemsPharmaceutical Analytics QuantStudio 5製薬・バイオ医薬品分析用途を意識したQuantStudio 5。性能、蛍光チャンネル、セキュリティオプションに対応する。公式URL 国内取扱 サーモフィッシャーサイエンティフィック（日本法人）
Thermo Fisher Scientific / Applied BiosystemsMycoSEQ Mycoplasma Detection KitリアルタイムPCRと組み合わせるマイコプラズマ検出キット。バイオプロダクションサンプルの迅速確認に使われる。公式URL 国内取扱 サーモフィッシャーサイエンティフィック（日本法人）
Thermo Fisher Scientific / Applied BiosystemsResDNASEQ Quantitative DNA Kits宿主細胞由来残存DNAの定量に使われるqPCRキット。CHO、HEK293、大腸菌などの残存DNA確認に使われる。公式URL 国内取扱 サーモフィッシャーサイエンティフィック（日本法人）
SartoriusMicrosart Mycoplasma qPCR KitsqPCRベースのマイコプラズマ検出キット。ATMPやバイオ医薬品開発の迅速検出に使われる。公式URL 国内取扱 ザルトリウス・ジャパン（日本法人）
qPCR試薬・マスターミックス（5）
Thermo Fisher Scientific / Applied BiosystemsTaqMan Fast Advanced / PowerUp SYBR Green Master Mixプローブ法・SYBR Green法に使われるqPCRマスターミックス。核酸定量や遺伝子発現解析に使われる。公式URL 国内取扱 サーモフィッシャーサイエンティフィック（日本法人）
Bio-RadSsoAdvanced / iTaq Universal Supermixプローブ法・SYBR Green法のリアルタイムPCRに使われるマスターミックス。公式URL 国内取扱 バイオ・ラッド ラボラトリーズ（日本法人）
核酸抽出・前処理装置（4）
Thermo Fisher ScientificKingFisher Flex磁気ビーズベースの核酸抽出装置。残存DNA試験、マイコプラズマ、ウイルス検出前処理に使われる。公式URL 国内取扱 サーモフィッシャーサイエンティフィック（日本法人）
データ管理・LIMS連携（4）
Thermo Fisher ScientificQuantStudio Design and Analysis SoftwareCt解析、標準曲線、融解曲線、遺伝子発現解析などに使われるQuantStudio解析ソフト。公式URL 国内取扱 サーモフィッシャーサイエンティフィック（日本法人）
Bio-RadCFX Maestro SoftwareCFXシリーズのqPCR解析ソフトウェア。遺伝子発現解析、融解曲線、プレート解析に使われる。公式URL 国内取扱 バイオ・ラッド ラボラトリーズ（日本法人）
Thermo Fisher ScientificSampleManager LIMSqPCR結果、品質試験、サンプル情報の管理に使われるLIMS。公式URL 国内取扱 サーモフィッシャーサイエンティフィック（日本法人）
関連製品
掲載情報の確認日：2026年7月（メーカー公開情報をもとに編集部が確認。最新・正確な仕様は各社公式をご確認ください）