細胞株開発・クローン選抜
候補クローンや培養細胞の汚染確認に使われる。
主な用途
- 候補クローン確認
- 汚染確認
Product Guide
マイコプラズマ試験
マイコプラズマ試験は、細胞培養においてマイコプラズマ汚染の有無を確認するための試験です。マイコプラズマは細菌よりも小さく、一般的な無菌試験では検出できない場合があります。培養細胞に感染すると、細胞増殖、代謝、遺伝子発現、タンパク質産生、品質評価結果などに影響することがあるため、細胞を扱う工程では重要な汚染確認項目になります。
用途・特徴
マイコプラズマ試験は、細胞培養の品質管理と安全性確保を目的として行われます。汚染は培地の濁りや細胞形態の変化だけでは気づきにくいため、PCR法、リアルタイムPCR法、培養法、DNA染色法、発光法、受託試験などを使い分けて確認します。
研究開発段階では迅速に確認できるPCR法や発光法が使われることが多く、GMP製造や規制対応では、薬局方やガイドラインに沿った試験法、バリデーション済みの迅速法、外部受託試験などが使われます。
Point
- 細胞培養で重要な汚染確認項目の一つ
- 一般的な無菌試験だけでは検出できない場合がある
- 細胞増殖、代謝、遺伝子発現、タンパク質産生に影響する可能性がある
- セルバンク作製時の品質試験として重要
- PCR法、培養法、DNA染色法、発光法、受託試験などがある
- GMP製造では、規制対応やバリデーションが重要になる
使用方法
一般的には、細胞培養上清や細胞懸濁液を採取し、目的に応じた試験法でマイコプラズマ汚染の有無を確認します。
1培養細胞・培養上清を採取する
2必要に応じて前処理を行う
3試験法を選択する（PCR/培養/染色/発光）
4検出キット・試薬・装置・受託を利用する
5マイコプラズマ汚染の有無を判定する
6セルバンク・工程の品質確認に利用する
実際の条件は、試験法、細胞種、サンプル量、測定目的、GMP対応の要否、バリデーション要件、試験頻度、外部委託の有無によって変わります。
PCR法と培養法の違いは？
マイコプラズマ試験には複数の方式があります。代表的なPCR法（迅速）と培養法（規制対応）を比較します。
結論
開発段階では迅速性を重視してPCR法や発光法を使い、GMPや規制対応では培養法、指標細胞を用いたDNA染色法、バリデーション済みのNAT法、受託試験などを組み合わせることがあります。
主な検出対象
生きたマイコプラズマ
マイコプラズマDNA
測定時間
数週間かかる場合がある
数時間〜1日程度
主な用途
規制対応、確認試験、薬局方試験
迅速確認、工程管理、スクリーニング
強み
古典的で規制対応に使われやすい
迅速で高感度
注意点
時間がかかる、培養できない種への対応に注意
阻害物質、偽陽性・偽陰性、バリデーションに注意
向く場面
セルバンク試験、GMP品質試験
開発段階、細胞治療、工程内管理
主な試験方式
| 試験方式 | 内容 | 向く用途 |
|---|---|---|
| リアルタイムPCR法 | マイコプラズマDNAを増幅・検出する方法 | 迅速確認、工程管理、細胞治療、バイオ医薬品製造 |
| 通常PCR法 | PCR増幅後に検出する方法 | 研究用途、スクリーニング |
| 培養法 | 液体培地・寒天培地などで培養して確認する方法 | GMP品質試験、薬局方対応 |
| DNA染色法 | Hoechstなどの蛍光染色によりマイコプラズマ由来DNAを観察する方法 | 研究用途、確認試験 |
| 発光法 | マイコプラズマ由来酵素活性などを発光で検出する方法 | 簡易スクリーニング、培養管理 |
| 受託試験 | 専門機関にサンプルを送り、規制対応試験として実施する方法 | GMP、品質保証、申請資料対応 |
使用される工程
マイコプラズマ試験は、細胞を扱う工程で広く使われます。
セルバンク
MCB、WCB作製時の品質試験として使われる。
主な用途
- MCB/WCB品質試験
- 出荷前確認
シードトレイン
培養開始前後の細胞状態確認、汚染確認に使われる。
主な用途
- 培養前後確認
- 汚染確認
本培養
工程中の異常確認、品質管理、逸脱調査に関係する。
主な用途
- 工程内確認
- 逸脱調査
細胞治療製造
原料細胞、培養細胞、最終製品の安全性確認に使われる。
主な用途
- 原料・最終製品
- 安全性確認
再生医療等製品
細胞加工工程や品質管理で使われる。
主な用途
- 細胞加工
- 品質管理
ウイルスベクター製造
Producer Cellや製造細胞の汚染確認に使われる。
主な用途
- 製造細胞確認
- 汚染確認
GMP製造
品質保証、出荷判定、規制対応試験として使われる。
主な用途
- 出荷判定
- 規制対応
使用されるモダリティー
マイコプラズマ試験は、細胞を扱うモダリティーで広く使われます。
抗体医薬
関連度高
CHO細胞セルバンクシードトレイン本培養
製造細胞の汚染確認、MCB/WCB品質試験に使われる。
二重特異性抗体
関連度高
CHO細胞セルバンク本培養
基本的には抗体医薬と同様に使われる。
Fc融合・組換えタンパク質
関連度高
CHOHEK293などの産生細胞
産生細胞の品質確認に使われる。
ADC
関連度高
抗体原薬製造CHO細胞セルバンク
抗体部分の製造細胞管理で使われる。
AAV
関連度高
HEK293Sf9Producer Cell
ウイルスベクター製造細胞の汚染確認に使われる。
レンチウイルス
関連度高
Producer CellPackaging Cell
製造細胞の品質確認に使われる。
細胞治療
関連度高
CAR-TT細胞NK細胞MSC
原料細胞や培養細胞の安全性確認に使われる。
iPS細胞・幹細胞由来製品
関連度高
マスターセル管理分化工程拡大培養
細胞基盤や製造工程の品質確認に使われる。
ワクチン
関連度中〜高
細胞基材ウイルス増殖用細胞
細胞基材の汚染確認に使われる。
mRNA医薬・LNP
関連度低〜中
評価細胞酵素・原材料製造関連
mRNA合成本体よりも関連細胞評価や原材料側で関係する。
低分子医薬品
関連度低〜中
細胞アッセイ毒性評価
製造工程よりも評価系の細胞管理で使われる。
メーカー製品
リアルタイムPCR装置（8）
Thermo Fisher Scientific / Applied BiosystemsQuantStudio Real-Time PCR Systemsマイコプラズマ検出、残存DNA、遺伝子発現解析など幅広いqPCR用途で使われるリアルタイムPCR装置。公式URL Roche DiagnosticsLightCycler 480 Instrument II96/384ウェルフォーマットに対応するプレートベースのリアルタイムPCR装置。核酸検出・定量に使われる。公式URL Bio-RadCFX Opus Real-Time PCR Systems96/384ウェルなどに対応するリアルタイムPCRシステム。研究・品質確認用途で使われる。公式URL QIAGENRotor-Gene Qローター型リアルタイムPCR装置。qPCR、HRM解析などに対応する。公式URL AgilentAriaMx Real-Time PCR System96ウェルタイプのリアルタイムPCR装置。TaqManプローブやSYBR系検出に対応する。公式URL Takara BioThermal Cycler Dice Real Time System IV日本語対応ソフトウェアや国内サポート体制が特徴のリアルタイムPCR装置。公式URL Analytik JenaqTOWER iris / qTOWER seriesqPCR解析や自動化ワークフローで使われるリアルタイムPCR用サーマルサイクラー。公式URL Azure BiosystemsAzure Cielo Real-Time PCR SystemコンパクトなリアルタイムPCR装置。研究用途のqPCR測定に使われる。公式URL
マイコプラズマ検出キット・試薬（14）
Thermo Fisher Scientific / Applied BiosystemsMycoSEQ Mycoplasma Detection KitリアルタイムPCRベースの検出キット。バイオ医薬品・細胞培養サンプルの迅速確認に使われる。公式URL Thermo Fisher Scientific / Applied BiosystemsMycoSEQ Plus Mycoplasma Detection Kitバイオプロダクションや細胞治療サンプル向けのqPCRベース検出キット。公式URL LonzaMycoAlert Mycoplasma Detection Kitマイコプラズマ酵素活性を利用する発光系キット。簡便なスクリーニングや培養管理に使われる。公式URL LonzaMycoAlert PLUS Mycoplasma Detection KitMycoAlertシリーズの高感度タイプ。発光系によるマイコプラズマ検出に使われる。公式URL SartoriusMicrosart ATMP MycoplasmaqPCRベースの迅速検出キット。ATMPや細胞治療関連サンプルの確認に使われる。公式URL SartoriusMicrosart RESEARCH Mycoplasma研究・工程内管理向けのqPCRベース検出キット。公式URL Minerva BiolabsVenorGeM qEPリアルタイムPCRを用いた検出キット。細胞培養上清などの迅速スクリーニングに使われる。公式URL Minerva BiolabsVenorGeM Classic通常PCR法による検出キット。培養上清、培地、サンプルの確認に使われる。公式URL Merck / Sigma-AldrichLookOut Mycoplasma PCR Detection KitPCR法による検出キット。Mycoplasma、Acholeplasma、Ureaplasma汚染の確認に使われる。公式URL ATCCUniversal Mycoplasma Detection KitPCRベースの検出キット。細胞培養中のマイコプラズマ汚染確認に使われる。公式URL PromoCellPCR Mycoplasma Test KitPCR法による検出キット。細胞培養サンプルの汚染確認に使われる。公式URL InvivoGenPlasmoTestHEK-Blue細胞を利用した検出系。細胞培養サンプルの汚染確認に使われる。公式URL InvivoGenPlasmocin / Mycoplasma関連製品マイコプラズマ汚染の予防・除去・検出に関連する製品群。公式URL Norgen BiotekMycoplasma PCR Detection KitPCR法による検出キット。細胞培養サンプルの確認に使われる。公式URL
DNA染色・蛍光染色試薬（6）
Thermo Fisher Scientific / InvitrogenHoechst 33258DNA蛍光染色色素。細胞核染色やマイコプラズマDNA染色法で使われる。公式URL Thermo Fisher Scientific / InvitrogenDAPIDNA染色用の蛍光色素。蛍光顕微鏡観察で使われる。公式URL Merck / Sigma-AldrichHoechst 33258 / DAPIDNA染色用蛍光色素。細胞培養サンプルの蛍光観察に使われる。公式URL DojindoDNA染色関連試薬蛍光観察や細胞染色に使われる試薬群。研究用途の確認試験で利用される。公式URL Nacalai TesqueDAPI / Hoechst関連試薬研究用途のDNA染色試薬として使われる。公式URL FUJIFILM WakoDNA染色関連試薬蛍光染色や細胞観察に使われる研究用試薬を展開。公式URL
受託試験サービス（11）
Eurofins BioPharma Product TestingMycoplasma Testingバイオ医薬品、ATMP、細胞基材向けのマイコプラズマ試験。規制対応試験として利用される。公式URL Eurofins BioPharma Product Testing KyotoBiosafety / Mycoplasma Testing国内拠点でのバイオ医薬品安全性評価。マイコプラズマ試験やウイルスクリアランス試験などに対応。公式URL Charles River LaboratoriesMycoplasma Testing Services開発・製造段階に対応するマイコプラズマ試験サービス。各種規制要件に沿った試験に対応。公式URL Charles River LaboratoriesMicrobiology Testing Servicesマイコプラズマ試験、微生物試験、迅速法などの微生物関連試験サービス。公式URL SGSCell/Virus Bank CharacterizationRCB、MCB、WCBなどのセルバンク特性解析。品質評価の一部としてマイコプラズマ試験が関係する。公式URL Merck / BioRelianceBioReliance Contract Testing Servicesバイオセーフティ試験、分析開発、規制対応の受託試験サービス。公式URL WuXi AppTecBiosafety Testing Servicesバイオ医薬品・細胞治療向けのバイオセーフティ試験、品質試験サービス。公式URL Nelson LabsMycoplasma / Microbiology Testing医薬品・医療機器・バイオ医薬品関連の微生物試験サービス。公式URL Eurofins GenomicsMycoplasmacheckqPCRベースのマイコプラズマ検出サービス。細胞培養サンプルの汚染確認に使われる。公式URL Bionique Testing LaboratoriesMycoplasma Testing Servicesマイコプラズマ試験に特化した受託試験サービス。公式URL TexcellBiosafety / Mycoplasma Testingバイオ医薬品・細胞基材向けのバイオセーフティ試験サービス。公式URL
関連装置・周辺製品（9）
Molecular DevicesSpectraMaxシリーズ発光・吸光・蛍光測定に対応するプレートリーダー。発光系アッセイの測定に利用される。公式URL BioTek / AgilentSynergyシリーズ発光・蛍光・吸光に対応するマルチモードプレートリーダー。細胞培養QC系の測定に使われる。公式URL Berthold TechnologiesCentro / TriStarシリーズルミノメーター、マルチモードリーダー。発光系アッセイの測定に使われる。公式URL PromegaGloMaxシリーズ発光・蛍光測定用のリーダー。発光系アッセイの測定装置として使われる。公式URL Thermo Fisher ScientificVarioskan / Fluoroskan / Luminoskan発光・蛍光・吸光測定に対応するプレートリーダー。発光系検出と組み合わせて使われる。公式URL Nikon蛍光顕微鏡DNA染色法によるマイコプラズマ確認で使用される蛍光顕微鏡。公式URL Evident蛍光顕微鏡DNA染色法や細胞観察に使われる蛍光顕微鏡。公式URL Leica Microsystems蛍光顕微鏡細胞観察、蛍光染色観察に使われる顕微鏡システム。公式URL Zeiss蛍光顕微鏡細胞観察、DNA染色観察に使われる顕微鏡システム。公式URL
