逆相HPLCカラム

逆相HPLCカラムは、シリカやポリマー粒子表面に結合させたC18・C8・C4などのアルキル鎖を固定相とし、疎水性相互作用の差で成分を分離します。移動相は水系とアセトニトリル/メタノール等の有機溶媒の混合で、有機溶媒比を上げて溶出させます。オリゴ核酸ではイオンペア試薬（TEAA等）、ペプチドではTFA/ギ酸を移動相に加えて保持と選択性を調整するのが一般的です。

選定軸は主に固定相化学（C18/C8/C4・エンドキャップ・ポーラー埋め込み）、粒子径と細孔径、カラム内径・長さ（分取スケール）、ハードウェア材質です。低分子・短鎖ペプチドは80〜120Åの汎用C18、長鎖オリゴや大きいペプチド/タンパク質は分子サイズに合わせた広細孔（200〜300Å）C4〜C8を選びます。分析は小粒子・小内径で高分離、分取は大内径・大粒子で負荷量と回収を優先します。

工程設計では、分析メソッドと分取メソッドの整合（スケールアップ時の保持・選択性の一致）が重要です。同一固定相系で内径と充填量をスケールアップし、線速度・グラジエント勾配を相似的に設計します。金属配位しやすいリン酸基を持つオリゴ核酸では、金属イオンによるピーク劣化を避けるためバイオイナート/PEEK流路や金属不活性化カラムが望まれます。