工程1：テンプレート直鎖化
切れ残りはリードスルーでdsRNAと過長鎖を生むため、直鎖化率と超らせん残存率を出荷前に確認する。
基準法アガロース/キャピラリーゲル電気泳動による直鎖化率・超らせん残存率の確認
Standard Process Map核酸医薬
mRNA-LNP製造 基準工程マップ
この基準工程マップは、mRNA-LNPの製造と分析を、IVTによる合成→キャッピング→精製→LNP封入→品質特性解析の順に整理しています。mRNAの品質と脂質ナノ粒子の両方が効き目を左右し、最適な手法は条件で変わるため、各工程に代替・補完法も併記しています。
製法の条件で切り替える
◇の付いた3工程は、この条件で基準法が変わります。
全体像
工程名を押すと、その工程の説明へ移ります。工程を押すと、その場で詳しい説明が開きます。◇は条件で基準法が変わる工程です。
原料（別マップ）
製法の条件で切り替える
◇の付いた3工程は、この条件で基準法が変わります。
合成・反応（3工程）
工程2：IVT・mRNA合成
◇ 分岐Mg2＋やNTP比で収量・完全性・dsRNA量が変わるため、AEX-HPLCで反応進行を見て止めどきを判断する。
基準法T7 RNAポリメラーゼによるIVT＋陰イオン交換(AEX)-HPLCでの反応モニタリング
転写後・酵素的キャッピング（Vacciniaキャップ酵素＋2'-O-MTase）では
キャップ類縁体非添加の標準NTP組成でT7 IVT（共転写キャップ無し）
工程3：キャッピング
◇ 分岐未キャップmRNAは翻訳されず炎症源になるため、Cap1の正しい付加率をLC-MSで定量する工程。
基準法酵素消化＋逆相/イオンペア逆相LC-MSによる5'キャップ構造同定とキャッピング効率定量
転写後・酵素的キャッピング（Vacciniaキャップ酵素＋2'-O-MTase）では
転写後・酵素的キャッピング反応（37℃・約1時間）
精製（5工程）
工程4：テンプレートDNA除去
◇ 分岐鋳型DNAを分解して反応を止め、安全性不純物となる残存DNAをqPCRで規格内に抑える工程。
基準法DNase I消化によるテンプレート分解＋qPCRでの残存DNA定量
転写後・酵素的キャッピング（Vacciniaキャップ酵素＋2'-O-MTase）では
DNase I消化＋qPCR残存DNA定量は共通だが、ツーポット法ではDNase後に中間精製→酵素的キャッピング→最終精製の順で工程が挿入される（ワンポット改良法では希釈後に同槽…
工程5：捕捉前コンディショニング／緩衝液交換
高濃度の塩・NTP・酵素を含むIVT反応液は親和捕捉に直接負荷できないため
基準法中空糸TFFによる濃縮・透析濾過（100 kDa MWCO、ssRNA用）で捕捉前の緩衝液交換と脱塩を実施
工程6：キャプチャー精製
ポリAテールを釣り針にdT樹脂で全長mRNAだけを捕捉し、不完全鎖や酵素を洗い流す精製の中核。
基準法オリゴ(dT)リガンド親和性クロマトグラフィー（ポリA捕捉）
工程7：dsRNA除去・定量
dsRNAは強い自然免疫を誘発し効力を下げるが落ちにくいため、専用除去とJ2抗体での定量が要る。
基準法セルロース/IP-RP-HPLCによるdsRNA除去＋J2抗dsRNA抗体イムノアッセイ
工程8：UF/DF・バッファ交換
塩・低分子・エタノールを抜き目的濃度と組成へ整える、LNP化と保存安定性を左右する仕上げ工程。
基準法限外濾過/透析濾過（UF/DF, TFF）によるバッファ交換と濃縮
製剤・充填（4工程）
工程9：脂質相・水相調製
微小流体混合の前に水相・脂質エタノール相をN/P比通りに精密調製する必要があるため
基準法mRNA原薬を低pH酢酸／クエン酸緩衝液（pH4〜5）へ希釈調製し、別途エタノールに溶かした脂質相を用意する二相調製（マイクロ流体での急速混合に備える前段）
工程10：LNP封入・ミキシング
水相mRNAと脂質相を急速混合し粒子を自己組織化させる、粒径・均一性・封入率を決める核心工程。
基準法マイクロ流体（または乱流ジェット）急速混合によるLNP自己組織化
工程11：エタノール除去・濃縮
残留エタノールと低pHを除去し生理的pHの最終緩衝液へ交換しないと製剤化できないため
基準法希釈・中和後に平膜カセットTFF
工程12：フィル＆フィニッシュ
0.2µm除菌ろ過と無菌充填を行い、壊れやすいLNPを凍結/凍乾の条件最適化で安定化する工程。
基準法0.2µm除菌ろ過＋無菌充填（必要に応じ凍結乾燥/凍結）
品質特性・分析（8工程）
工程13：インテグリティ評価
断片化したmRNAは翻訳されず効力が落ちるため、CGEで全長率（%全長）を測り品質指標とする。
基準法キャピラリーゲル電気泳動(CGE)による全長率・スメア解析
工程14：同一性・配列確認
取り違えや変異を防ぎ狙った配列であることを確認する、安全性・有効性に直結する同一性試験。
基準法逆転写シーケンシング（次世代シーケンス/RT-PCR）による配列同一性確認
工程15：ポリAテール解析
ポリAテール長は安定性と翻訳効率を左右するため、その分布が狙い通りかをHPLC/MSで確認する。
基準法酵素消化＋IP-RP-HPLC/LC-MSによるポリAテール長解析
工程16：粒径・ゼータ電位
粒径・PDI・ゼータ電位は体内分布・取り込み・安定性を左右するため、出荷ごとにDLS/ELSで測る。
基準法動的光散乱(DLS)による粒径・PDI、電気泳動光散乱によるゼータ電位
工程17：封入率・含量
裸のmRNAは不安定で免疫を刺激するため、含量と粒子内封入率（EE%）をRiboGreenで規格確認する。
基準法Quant-iT RiboGreen蛍光アッセイ
工程18：脂質定量・不純物
脂質比と分解物は送達効率・安全性に直結するため、HPLC-CAD/LC-MSで定量と不純物を追う工程。
基準法HPLC-荷電化粒子検出(CAD)／LC-MSによる脂質定量・不純物プロファイル
工程19：ポテンシー試験
細胞に入れ標的タンパク質を作れるかを測る、製品の真の効き目とロット間一定性を保証する力価試験。
基準法細胞ベースin vitro発現アッセイ
工程20：一般・安全性試験
pH・浸透圧・外観・無菌・エンドトキシンは注射剤として患者投与に必須の出荷規格項目。
基準法薬局方準拠の一般試験（pH/浸透圧/外観/無菌試験/エンドトキシン試験(LAL)）
公開情報にもとづく一般的な整理です。実際の構成は条件により異なります。