IVT用酵素・試薬（T7・NTP・DNase）

IVT反応は、直鎖化した鋳型DNAのT7（またはSP6・T3）プロモーター下流をRNAポリメラーゼが転写し、NTPを基質に一本鎖RNAを合成する反応です。N1-メチルシュードウリジン（m1Ψ）などの修飾NTPを用いると、免疫原性の低減と翻訳効率の向上が期待できます。酵素・試薬の品質が、全長収量、二本鎖RNA（dsRNA）副生成物、中断配列、残存DNAといった不純物プロファイルを直接左右します。

選定では、グレード（研究用／GMP）、エンドトキシン・ヌクレアーゼ・残存宿主由来不純物の規格、酵素の比活性とロット間再現性、修飾NTPの取り込み効率、鋳型直鎖化に使う制限酵素の認識配列とスター活性、DNaseの完全分解性とRNAへの影響を確認します。トレーサビリティとDMF・規格書などの規制サポートも重要です。

工程設計では、IVT反応条件（酵素・NTP・Mg2+・温度・時間）の最適化に加え、Cappingストラテジー（共転写キャップ vs 酵素的キャップ）との整合、転写後のDNase処理とその後の精製（dsRNA除去・NTP/酵素除去）まで一連で考えます。連続生産や大スケールでは、原材料の供給安定性とコストも設計要素になります。