Stem Cell · iPSC-derived製造工程

iPSC由来細胞（神経・心筋・網膜）の製造工程

iPS細胞を神経・心筋・網膜色素上皮（RPE）などに分化させ、失われた細胞を補う製剤を作ります。他家のiPS細胞ストックから作る方式が、主流になりつつあります。どの段階でも、未分化のまま残る細胞と核型（染色体の数と形）の異常という、iPS細胞由来に特有のリスクを抑えます。

製造工程

1
未分化のiPS細胞を維持・拡大
セルバンクのiPS細胞を、未分化のまま、多能性（さまざまな細胞になれる性質）を保って増やします。他家のストックでは1つのロットから多くの製剤を作るので、継代しても未分化マーカーと遺伝的な安定性が保たれているかを確かめます。基材は、フィーダーフリー・ゼノフリーのものを使います。
培地iPS・幹細胞未分化維持培地材料フィーダーフリー培養基材（ラミニン/ビトロネクチン）
2
目的細胞へ段階的に分化誘導
シグナル因子や小分子を時期ごとに切り替え、目的の細胞へ段階的に分化させます。手順は神経・心筋・網膜で大きく違います。分化がぶれると純度と力価まで変わるので、途中の段階でも確かめます。
培地iPSC 分化誘導培地（神経/心筋/網膜）試薬分化誘導・分化能評価試薬
3
目的細胞を純化・選別
分化させた細胞には目的外の細胞や未熟な細胞が混じるので、表面マーカーなどで目的の細胞を選びます。残った未分化細胞をここでどこまで除けるかが、安全性を左右します。純度と回収率の釣り合いも取ります。
試薬分化誘導・分化能評価試薬
4
QC（残存未分化細胞・核型）
残った未分化のiPS細胞を、LIN28Aなどのマーカーで高感度に検出し、閾値を下回ることを確かめます。核型解析やSNPアレイで、染色体やゲノムの異常も調べます。どちらも造腫瘍性（腫瘍をつくるおそれ）に関わる中心の試験で、ロットごとに行います。
分析残存未分化iPS細胞検出（LIN28A等）分析核型解析（受託・SNPアレイ）
5
製剤化
細胞数・生存率・組成を規格に合わせて製剤にします。形は投与する場所で決まり、網膜では細胞懸濁液やシート、神経や心筋では懸濁液や組織に似た構造体を使います。凍結して運ぶ場合は、解凍後も生存率と機能を保てる条件を決めておきます。