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選択培地・選択試薬
選択培地・選択試薬は、遺伝子導入後の細胞集団から、目的遺伝子を保持した細胞を選び出すために使われる培地・試薬です。 CHO細胞株開発では、トランスフェクションやエレクトロポレーションの後に使用され、安定発現プールの作製や高産生クローン選抜の入口になります。
用途・特徴
目的遺伝子を導入したあと、すべての細胞が同じように目的遺伝子を保持しているわけではありません。
選択培地や選択試薬を用いることで、目的遺伝子を保持した細胞を残し、保持していない細胞を除外しながら細胞集団を作っていきます。
Point
- 遺伝子導入後の細胞選抜に使われる
- 安定発現プール作製の入口になる
- 高産生クローン選抜の前段階で使われる
使用方法
基本的には、遺伝子導入後の細胞を選択培地または選択試薬を含む培地で培養します。
1CHO細胞へ遺伝子導入
2回復培養
3選択培地・選択試薬を添加
4目的遺伝子を保持した細胞を選抜
5安定発現プール作製
6単一細胞化・クローン選抜へ進む
実際の条件は、宿主細胞、発現ベクター、選択マーカー、培地条件によって変わります。
トランスフェクション試薬との違いは？
トランスフェクション試薬は遺伝子を細胞へ導入するための試薬です。一方、選択培地・選択試薬は、導入後に目的遺伝子を保持した細胞を選び出すために使われます。
主な役割
遺伝子導入
遺伝子導入後の細胞選抜
使用タイミング
遺伝子導入時
遺伝子導入後
目的
DNA、RNAなどを細胞へ入れる
目的遺伝子を持つ細胞を残す
関連工程
一過性発現、安定発現株作製
安定発現プール、クローン選抜
メーカー製品
Thermo Fisher Scientific / GibcoCHOvantage GS Cell Line Development KitGS選択系を用いた細胞株開発キット。公式URL Thermo Fisher Scientific / GibcoFreedom ExpiCHO-S KitPuromycin選択を含む細胞株開発キット。公式URL Merck / Sigma-AldrichPuromycin、Hygromycin、Geneticin (G418) など選択抗生物質として広く使用される。公式URL InvivoGenPuromycin、Blasticidin、Zeocin など細胞選択用抗生物質を幅広く展開。公式URL FUJIFILM Irvine ScientificBalanCD CHO系培地CHO細胞株開発向け培地として利用されることがある。公式URL SartoriusCHO Media PlatformCHO細胞株開発・培養向け培地群。公式URL
