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CHOトランスフェクション試薬
トランスフェクション試薬は、CHO細胞やHEK293細胞などの哺乳類細胞へ、プラスミドDNAなどの核酸を導入するための試薬です。 抗体医薬の細胞株開発では、目的抗体遺伝子を細胞へ導入する入口として使われます。
用途・特徴
一過性発現では、抗体候補や組換えタンパク質を短期間で発現させる目的で使われます。
CHO細胞ではエレクトロポレーションも使われますが、トランスフェクション試薬は装置なしで始めやすく、多条件検討や一過性発現に使いやすい点が特徴です。
Point
- 装置なしで始めやすい
- 一過性発現や抗体候補比較に向く
- DNA量、試薬量、細胞密度の最適化が重要
使用方法
基本的には、プラスミドDNAとトランスフェクション試薬を混合し、DNAと試薬の複合体を作ってから細胞へ添加します。
1CHO細胞を準備する
2プラスミドDNAと試薬を混合する
3DNA-試薬複合体を形成する
4細胞へ添加する
5一定時間培養する
6発現確認または選択培養へ進む
実際の条件は、使用する細胞株、培地、DNA量、細胞密度、培養スケール、試薬の種類によって変わります。
エレクトロポレーションとの違いは？
CHO細胞への遺伝子導入では、トランスフェクション試薬とエレクトロポレーションの両方が使われます。用途と条件検討のしやすさが選択のポイントになります。
導入方法
DNAと試薬の複合体を細胞へ取り込ませる
電気パルスで細胞膜を一時的に開く
主な強み
装置なしで始めやすく、多条件検討しやすい
導入しにくい細胞や安定発現株作製で使いやすい
向く場面
一過性発現、抗体候補比較、少量タンパク質調製
安定発現株作製、ゲノム編集、条件最適化
注意点
試薬毒性、試薬コスト、細胞との相性
細胞ダメージ、装置・消耗品コスト
条件検討
DNA量、試薬量、細胞密度、培地条件
電圧、パルス、バッファー、細胞密度
CHOでは、安定発現株作製ではエレクトロポレーションが選択肢になりやすい一方、一過性発現や複数条件の比較ではトランスフェクション試薬が使いやすい場合があります。
メーカー製品
Thermo Fisher ScientificExpiFectamine CHO / ExpiCHO Expression SystemCHO一過性発現向け。高密度CHO培養でのタンパク質発現に使われる発現システム。公式URL Thermo Fisher ScientificLipofectamine 3000哺乳類細胞向けの汎用トランスフェクション試薬。CHO専用というより広い細胞種向け。公式URL Mirus BioCHOgro / TransIT-PROCHOやHEKなどの組換えタンパク質発現向け。CHO一過性発現の文脈で使われる。公式URL Polyplus / SartoriusFectoCHO / FectoPROCHO/HEKなどのタンパク質発現向けトランスフェクション試薬。公式URL Takara Bio / ClontechXfect Transfection Reagent哺乳類細胞向けの汎用トランスフェクション試薬。公式URL PEI系PEI MAXなどコスト重視やスケール検討で使われることがあるポリマー系試薬。公式URL
