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エレクトロポレーター

エレクトロポレーターは、電気パルスを使って細胞膜を一時的に透過化し、DNA、RNA、Cas9 RNPなどを細胞内へ導入するための装置です。 CHO細胞株開発では、目的遺伝子の導入、安定発現株作製、ゲノム編集、条件最適化などで使われます。

CHO細胞安定発現株作製ゲノム編集条件最適化

用途・特徴

エレクトロポレーターは、トランスフェクション試薬では導入しにくい細胞や、安定発現株作製、CRISPR/Cas9ゲノム編集などで使われることがあります。

トランスフェクション試薬と比べると、装置と専用消耗品が必要になりますが、電圧、パルス幅、パルス回数、バッファー条件などを調整することで、細胞種や導入物に合わせた条件検討ができます。

Point

基本的には、細胞と導入したい核酸・タンパク質を専用バッファー中で混合し、キュベットや専用チップ、プレートに入れて電気パルスをかけます。

1CHO細胞を準備する

2DNA、RNA、Cas9 RNPなどを準備する

3細胞と導入物を専用バッファー中で混合する

4キュベット、チップ、プレートにセットする

5電圧・パルス条件を設定する

6電気パルスをかける

7回復培養へ移す

8選択培養または確認へ進む

実際の条件は、使用する細胞株、細胞密度、導入物、バッファー、装置、消耗品によって変わります。メーカーのプロトコールをもとに、導入効率と生存率のバランスを確認します。

CHO細胞への遺伝子導入では、トランスフェクション試薬とエレクトロポレーションの両方が使われます。

導入方法

DNAと試薬の複合体を細胞へ取り込ませる

電気パルスで細胞膜を一時的に開く

主な強み

装置なしで始めやすく、多条件検討しやすい

導入しにくい細胞や安定発現株作製で使いやすい

向く場面

一過性発現、抗体候補比較、少量タンパク質調製

安定発現株作製、ゲノム編集、条件最適化

注意点

試薬毒性、試薬コスト、細胞との相性

細胞ダメージ、装置・消耗品コスト

条件検討

DNA量、試薬量、細胞密度、培地条件

電圧、パルス、バッファー、細胞密度

CHOでは、一過性発現や抗体候補比較ではトランスフェクション試薬が使いやすい場合があります。一方で、安定発現株作製やゲノム編集では、エレクトロポレーションが選択肢になりやすい場合があります。