Cell Therapy · CAR-T / TCR-T製造工程
CAR-T／TCR-T 細胞治療（自家・他家）の製造工程
T細胞にCAR・TCRの遺伝子を入れ、投与に必要な数まで増やして製剤にします。自家は患者1人に1ロットを作り、他家は大量に作って作り置き（オフ・ザ・シェルフ）を目指します。材料が生きた細胞なので、全工程を閉鎖系（外気に触れない流路）の無菌操作で進めます。
製造工程
- 1
アフェレーシスでT細胞を採取
アフェレーシス（血液から白血球などの成分だけを取り出す採血）で、T細胞を含む単核球を集めます。自家では、患者の体調や前治療、リンパ球の数が材料の質を決めます。ここで付けた識別番号を、ロットの最後まで引き継ぎます。
- 2
目的のT細胞を選別
目的のT細胞を選び、赤血球・血小板・単球などを除きます。自家の材料は患者ごとに組成が大きく違い、CD4とCD8の比が偏ると、増え方や最終製剤の性質まで変わります。
- 3
CD3/CD28で活性化
anti-CD3/CD28の刺激試薬で、休止状態のT細胞を増殖できる状態にします。分裂を始めた細胞ほど、ウイルスで遺伝子が組み込まれやすくなります。刺激の強さと期間は、最終製剤の分化の状態（メモリー型かエフェクター型か）を左右します。
- 4
レンチ／レトロ・エレクトロポレーションで遺伝子導入
レンチ／レトロウイルスベクターなら遺伝子はゲノムに組み込まれ、エレクトロポレーション（電気パルスで細胞膜に穴を開ける方法）ならウイルスなしで入れられます。他家では、ゲノム編集で細胞がもとから持つTCRなどを壊し、拒絶やGVHD（移植した細胞が患者を攻撃する病気）を防ぐ設計もあります。導入後は、1細胞あたりのベクターコピー数（VCN）を測ります。
- 5
拡大培養
遺伝子を入れたT細胞を、投与に必要な数まで増やします。閉鎖系の自動培養装置なら、無菌を保ちやすく、作業者による差も減ります。培養が長すぎると疲弊（exhaustion）や分化が進むので、必要以上に培養しません。
- 6
洗浄・濃縮して製剤化・凍結
培養液や残った試薬、刺激用のビーズを洗い流し、細胞を濃縮して凍結保護液に入れます。凍結バッグに詰め、速度制御凍結（決めた速さで温度を下げる方法）で凍らせます。他家では、1ロットを何回分にも分けて詰めます。
品質管理（QC）の要点
同一性は、CAR・TCRの発現と、どの患者・ドナーの細胞かの記録で確かめます。
- 純度では、T細胞の内訳と、目的外の細胞・刺激ビーズ・ベクターの残りを測ります。
- 力価は、CAR陽性率と、がん細胞を殺す力やサイトカインを出す力で見ます。
- 安全性では、VCN、増える能力を持つウイルス（RCL／RCR）の否定、無菌・マイコプラズマ・エンドトキシンが必須です。
- 出荷までの時間が短いので、迅速法（短時間で結果が出る試験）も使います。
制度・規制の留意点
CAR-T／TCR-Tの製品は、日本では薬機法の再生医療等製品にあたります。
- 製造は、GCTP省令（製造管理と品質管理の基準）に沿って、CPC（細胞加工施設）で行います。
- 自家では患者ごとの取り違え防止とトレーサビリティ、他家ではドナーの適格性と、大量に作っても品質がぶれないことが重点です。
- 遺伝子を入れるので、カルタヘナ法（遺伝子組換え生物の扱いを定める法律）への対応と、増える能力を持つウイルス・挿入変異・造腫瘍性の評価も要ります。