Stem Cell · MSC製造工程

間葉系幹細胞（MSC）の製造工程

骨髄・脂肪・臍帯などの組織からMSCを取り出し、性質を保ったまま投与に必要な量まで増やします。培養した細胞そのものが製品なので、材料の素性と、培養条件をそろえられるかが品質を左右します。最近は、健康なドナーの細胞をバンクにして、同じ品質で大量に届ける形が進んでいます。

製造工程

1
組織からMSCを分離
組織を酵素で消化するか、培養皿に貼りつく細胞を選んで（接着選択）、MSCを取り出します。最初の細胞の性質は組織やドナーでばらつくので、材料と採取条件を記録し、穏やかな解離条件を選びます。他家では、ドナーの適格性と感染症のスクリーニングが前提です。
試薬細胞解離酵素
2
無血清・異種成分フリーで拡大培養
患者に直接入れるので、ウシ胎児血清（FBS）に頼らない、無血清・ゼノフリー（ヒト以外の動物の成分を含まない）の培地を選びます。継代を重ねると老化し、骨・軟骨・脂肪に分化する力や免疫調節能が落ちるため、少ない継代で数を確保します。大量に作るなら、マイクロキャリアを使ったバイオリアクター培養も検討します。
培地間葉系幹細胞（MSC）培養培地試薬細胞解離酵素材料マイクロキャリア（大量培養）
3
細胞バンク（MCB/WCB）構築
増やしたMSCを、マスターセルバンク（MCB）とワーキングセルバンク（WCB）の2段階で凍結保存します。他家では1ロットのドナー細胞から多くの製品ロットを作るので、バンクの特性解析・無菌性・継代数が、その後のすべての製造の品質を決めます。
試薬凍結保存液
4
QC（表面マーカー・分化能）
CD73・CD90・CD105などが陽性で、造血系マーカーが陰性であることをフローサイトメトリーで確かめ、骨・軟骨・脂肪への分化能で機能を裏づけます。MSCにはこれ一つで決まるマーカーがないので、複数の指標を組み合わせます。免疫調節能をどう力価試験に反映するかが課題です。
装置フローサイトメトリー（表面マーカー）
5
凍結保存
規格を満たした製品や中間体を凍結保存します。凍害保護剤の組成、冷やす速さ、解凍後の回復で、投与時の生存率と機能が変わります。
試薬凍結保存液

品質管理（QC）の要点

単一のマーカーがないため、CD73・CD90・CD105などの陽性と、CD45・CD34などの陰性を組み合わせて同一性と純度を確かめます。

機能は3系統（骨・軟骨・脂肪）の分化能で、力価は免疫調節能を映す試験で見ます。
無菌・マイコプラズマ・エンドトキシンに加え、残った酵素や凍害保護剤も測ります。
ドナーから取った初代細胞なので、ロット間のばらつきと継代による老化に注意します。

制度・規制の留意点

MSCの製品は、日本では薬機法の再生医療等製品にあたります。

製造は、GCTP省令（製造管理と品質管理の基準）に沿って、CPC（細胞加工施設）で行います。
他家ではドナーの適格性と感染症のスクリーニング、自家では取り違え防止とトレーサビリティが重点です。
FBSなど動物由来の原料にはTSE／BSE（伝達性海綿状脳症／牛海綿状脳症）や免疫原性、感染症のリスクがあるため、無血清・ゼノフリーへの切り替えが重視されています。