Cell Therapy · NK / CAR-NK製造工程
NK細胞療法の製造工程
末梢血・臍帯血・iPS細胞からNK細胞を取り出し、活性化して大量に増やし、がん細胞を殺す力を持つ製剤にします。NK細胞はHLA（白血球の型）に縛られにくいので、ドナーの細胞から作り置きする他家の製造に向いています。
製造工程
- 1
NK細胞を採取・分離
材料から、CD56陽性・CD3陰性のNK細胞を取り出します。T細胞が混じるとGVHD（移植した細胞が患者を攻撃する病気）につながるので、磁気細胞分離などでCD3陽性の細胞を除きます。他家では、ドナーの選定とスクリーニングが品質の出発点です。
- 2
IL-2／IL-15などで活性化
IL-2やIL-15などのサイトカインで刺激し、がん細胞を殺す力と増える力を引き出します。サイトカインの種類・濃度・時間で、力価や疲弊（exhaustion）の度合いが変わります。ロット差を抑えるため、GMPグレードのサイトカインと培地を使います。
- 3
フィーダー細胞で高倍率に拡大
放射線で増えないようにしたフィーダー細胞（改変K562などの補助細胞）と一緒に培養し、NK細胞を大きく増やします。フィーダー細胞が製剤に残らないことと、照射で確かに増えなくなっていることを確かめます。
- 4
（必要に応じCAR導入）
CAR-NKでは、レンチウイルス、mRNA、トランスポゾンなどでCAR遺伝子を入れます。CAR陽性率やコピー数、挿入変異のリスクの評価が加わり、遺伝子改変製品としての要件も増えます。CARの発現は、フローサイトメトリーで確かめます。
- 5
QC（活性・表現型）
表現型（CD56陽性・CD3陰性、活性化マーカー、CAR）をフローサイトメトリーで確かめ、標的細胞を殺す力で力価を測ります。生存率、T細胞の混入率、残ったフィーダー細胞も測ります。投与までの時間が短いので、迅速法と工程内の管理を組み合わせます。
- 6
品質管理（QC）の要点
同一性は、CD56陽性・CD3陰性の表現型と、どのドナーの細胞かの記録で確かめます。
- 純度では、T細胞の混入率、残ったフィーダー細胞、細胞の破片（デブリ）を測ります。
- 力価は、がん細胞株を殺す力や、脱顆粒・サイトカイン産生などの機能試験で見ます。
- 無菌・マイコプラズマ・エンドトキシンは必須です。
- CAR-NKでは、CARの発現とベクターのコピー数も加わります。
制度・規制の留意点
NK細胞・CAR-NKの製品は、日本では薬機法の再生医療等製品にあたり、CARを入れると遺伝子改変製品としての要件が加わります。
- 製造は、GCTP省令（製造管理と品質管理の基準）に沿って、CPC（細胞加工施設）で行います。
- 他家では、ドナーのスクリーニング、ロットの均一性、ウイルス安全性、HLAに関わるリスクを特に重く見ます。
- T細胞の混入によるGVHDと、フィーダー細胞の残りは、NK細胞に特有のリスクです。