細胞株開発・クローン選抜
候補クローンの小型拡大、浮遊培養適応確認に使われる。
- クローン拡大
スピナーフラスコは、内部の撹拌子やインペラーを回転させながら、細胞やマイクロキャリアを懸濁状態で培養するための小型培養容器です。浮遊細胞の培養、マイクロキャリアを使った接着細胞の拡大培養、3D細胞凝集体や幹細胞、ワクチン用細胞基材の検討などで使われます。
スピナーフラスコは、少量スケールで撹拌培養を行うために使われます。内部のパドルや撹拌子を磁気スターラーで回転させ、培地中の細胞、マイクロキャリア、細胞凝集体を均一に懸濁します。これにより、Tフラスコのような静置培養よりも混合性が高く、マイクロキャリア上の接着細胞を拡大しやすくなります。
一方で、撹拌によるせん断、気泡、マイクロキャリア同士の衝突、細胞凝集、沈降、サンプリングばらつきには注意が必要です。
基本的には、スピナーフラスコに培地、細胞、必要に応じてマイクロキャリアを入れ、磁気スターラーや専用撹拌台で撹拌しながら培養します。
Tフラスコとスピナーフラスコは、どちらも小スケール培養に使われますが、培養方式が異なります。
Tフラスコは「静置で細胞を育てる容器」、スピナーフラスコは「撹拌しながら細胞やマイクロキャリアを育てる容器」と考えると整理しやすくなります。
静置培養
撹拌培養
接着細胞、初期回復、継代培養
浮遊細胞、マイクロキャリア培養
ほぼなし
内部撹拌で混合する
培地表面からの拡散
撹拌による混合で改善しやすい
面積拡大が中心
撹拌培養への橋渡しになる
回復培養、クローン培養、接着培養
小型撹拌培養、マイクロキャリア検討
培養面積、コンフルエンス
撹拌速度、せん断、沈降、泡
| 項目 | シェイクフラスコ | スピナーフラスコ |
|---|---|---|
| 混合方式 | フラスコ全体を振とう | 内部の撹拌子・インペラーで撹拌 |
| 必要装置 | CO2シェーカー、振とう機 | 磁気スターラー、撹拌台、CO2環境 |
| 主な対象 | 浮遊CHO、HEK293、微生物 | マイクロキャリア、接着細胞、浮遊細胞 |
| 酸素移動 | 振とう条件と液量に依存 | 撹拌条件とヘッドスペースに依存 |
| せん断 | 振とう速度で変化 | インペラー条件で変化 |
| 操作性 | シードトレインで標準的 | 条件検討・マイクロキャリアで使いやすい |
| スケールアップ | シェーカー→SUB/リアクター | 撹拌槽型リアクターへ接続しやすい |
| 注意点 | 振とう径、液量、キャップ通気 | 撹拌速度、インペラー形状、沈降 |
| 項目 | スピナーフラスコ | ベンチトップバイオリアクター |
|---|---|---|
| 制御性 | 低〜中 | 高い |
| pH制御 | 基本なし | あり |
| DO制御 | 基本なし | あり |
| 温度制御 | インキュベーターや外部環境依存 | ジャケットやヒーターで制御 |
| 撹拌 | 簡易撹拌 | インペラー、撹拌制御 |
| ガス供給 | ヘッドスペース中心 | スパージ、ヘッドスペース、MFCなど |
| データ取得 | 限定的 | pH、DO、温度、撹拌、ガスなど記録可能 |
| 向く用途 | 初期検討、マイクロキャリア試験 | 条件開発、スケールアップ、工程検討 |
| 注意点 | 再現性・制御性に限界 | 装置準備・コスト・操作が重い |
| 項目 | 内容 |
|---|---|
| マイクロキャリア | 接着細胞が付着する小さな担体 |
| スピナーフラスコの役割 | マイクロキャリアを均一に懸濁しながら培養する |
| 向く細胞 | Vero細胞、MSC、iPS由来細胞、接着HEK293など |
| 注意点 | 撹拌速度、接着効率、担体濃度、せん断、凝集 |
| スケールアップ先 | 撹拌槽型バイオリアクター、SUB、マイクロキャリア培養槽 |
| タイプ | 内容 | 向く用途 |
|---|---|---|
| ガラス製スピナーフラスコ | オートクレーブして再利用できるガラス容器 | 研究、条件検討、繰り返し使用 |
| ディスポーザブルスピナーフラスコ | 滅菌済み・使い捨てのプラスチック容器 | コンタミ低減、準備時間短縮 |
| サイドアーム付きスピナーフラスコ | サンプリングや添加がしやすい構造 | 長期培養、マイクロキャリア培養 |
| パドル型インペラー | 幅広い撹拌に使われる | 細胞懸濁、マイクロキャリア培養 |
| 磁気撹拌型 | 磁気スターラーで撹拌する | 小型・簡易培養 |
| 小容量タイプ | 125〜250 mL程度 | 初期条件検討 |
| 中容量タイプ | 500 mL〜1 L程度 | 小型スケールアップ |
| 大容量タイプ | 2〜5 L程度 | 研究・開発スケールの拡大培養 |
| マイクロキャリア対応型 | 底形状やインペラーで沈降を抑える | 接着細胞の撹拌培養 |
スピナーフラスコは、小型の撹拌培養が必要な工程で広く使われます。
候補クローンの小型拡大、浮遊培養適応確認に使われる。
評価用細胞や保存細胞の再立ち上げ後の小型拡大に使われる場合がある。
Tフラスコやプレートから撹拌培養へ移る段階で使われる。
融解後の細胞を回復させた後、撹拌培養へ移行する場合に関係する。
125 mL、250 mL、500 mLなどで段階的に培養量を増やす。
ベンチトップバイオリアクターやSUBへ移る前の条件確認に使われる。
接着細胞をマイクロキャリア上で増やす小型検討に使われる。
MSC、iPS由来細胞、オルガノイド、3D培養の検討で使われる。
Vero、HEK293、Sf9などの接着/浮遊培養検討に使われる。
撹拌速度、細胞密度、培地、マイクロキャリア条件の検討に使われる。
スピナーフラスコは、接着細胞やマイクロキャリア培養が関係する多くのモダリティーで使われます。