超遠心分離機（密度勾配）

密度勾配超遠心は、塩化セシウム（CsCl）やイオジキサノール（OptiPrep等）で形成した密度勾配の中に試料をかけ、各粒子を自身の浮遊密度に等しい位置（等密度点）まで沈降させて分離する装置です。AAVベクターでは、ゲノムを内包する実カプシド（フル）と内包しない空カプシド（エンプティ）で粒子密度が異なるため、勾配中で帯状に分かれます。サイズではなく密度で分けるため、サイズが近い空殻・実殻の分取に向き、分取（preparative）スケールで純度の高い実カプシド画分を回収できます。

選定軸は、最高回転数（および対応する相対遠心力RCF／k-factor）、ローター方式、処理容量、そしてGMP対応です。ローターはスイングバケット（界面が水平になり等密度バンドのフラクション回収が容易）、固定角（沈降は速いが壁効果が出る）、そして大容量を連続供給で処理する連続フロー型に大別されます。AAVの分取では分解能と回収性からスイングローター＋ステップ／連続勾配が定番で、大量処理やワクチン精製では連続フロー型が用いられます。

工程設計では、勾配媒体の選択（CsClは高分解能だが浸透圧・除去工程が必要、イオジキサノールは等浸透圧で粒子に穏やかだが分解能・分取性で運用差）、勾配の作り方（ステップ／連続）、ラン時間・温度、バンドの可視化と分画回収、回収後の脱塩・バッファー交換（透析／限外ろ過）までを一連で考えます。スループットや無菌性が要る本生産では連続クロマト等への置き換え・併用も検討されますが、空・実分離の分解能では密度勾配超遠心が基準法として残っています。