細胞株開発・クローン選抜
候補クローンの培養上清中の抗体濃度を測定します。
主な用途
- 培養上清の抗体濃度
- 候補比較
- クローン選抜支援
Product Guide
Protein A HPLC
Protein A HPLCは、Protein Aを固定化したカラムを使い、抗体を捕捉してHPLCで定量する分析方法です。IgG抗体のFc領域に結合する性質を持つため、培養上清中の抗体を選択的に捕捉でき、抗体の力価・濃度測定やハーベスト時期の判断にも使われます。
用途・特徴
Protein A HPLCは、培養上清や工程サンプル中のIgG抗体濃度を測定するために使われます。
サンプルをProtein Aカラムに通すと、Fc領域を持つ抗体がカラムに結合します。その後、低pHなどの溶出条件で抗体を溶出し、UV検出などでピーク面積を測定して濃度を算出します。
Point
- IgG抗体の濃度測定に使われる
- 培養上清中の抗体をProtein Aで捕捉できる
- 細胞株開発や本培養の抗体力価確認に使われる
- Fcを持たない抗体フラグメントには使いにくい場合がある
使用方法
基本的には、HPLCまたはUHPLCシステムにProtein Aカラムを接続し、サンプルを注入して抗体を捕捉・溶出・検出します。
1Protein Aカラムを平衡化する
2サンプルを前処理する
3サンプルをHPLCに注入する
4抗体をカラムに結合させる
5非結合成分を洗い流す
6低pHで抗体を溶出する
7UV検出器でピークを測定する
8検量線から濃度を算出する
9カラム洗浄・再平衡化を行う
実際の条件は、カラム種類、流速、注入量、溶出バッファ、検出波長、サンプル中の夾雑物、抗体サブクラス、Fc領域のProtein A結合性によって変わります。
ELISA・BLIとの違いは？
Protein A HPLC、ELISA、BLIは、いずれも抗体量や抗体の性質を確認するために使われます。
主な目的
Protein Aカラムで抗体を捕捉して定量する
抗原抗体反応で目的物質を定量する
センサーで結合や濃度をラベルフリー測定する
測定対象
Fcを持つIgG抗体
抗体、抗原、タンパク質、不純物
抗体、抗原、タンパク質相互作用
出力
クロマトグラム、ピーク面積
吸光度、検量線
センサーグラム、結合速度、濃度
強み
抗体濃度をクロマトで確認できる
多検体を比較的処理しやすい
結合評価も同時に行いやすい
注意点
Protein Aに結合しにくい分子には不向き
抗体ペアや洗浄条件に依存する
センサーや条件設定が重要
向く場面
抗体力価測定、本培養、工程確認
多検体スクリーニング、ELISAキット測定
結合評価、濃度測定、スクリーニング
Protein A HPLCは「抗体をProtein Aで捕まえてHPLCで定量する方法」、ELISAは「プレート上の抗原抗体反応で測る方法」、BLIは「センサー上の結合をリアルタイムに見る方法」と考えるとわかりやすくなります。
使用される工程
Protein A HPLCは、抗体の濃度や力価を確認する工程で使われます。
産生量スクリーニング
高産生クローンの選抜に使われます。
主な用途
- 高産生クローン選抜
- 力価比較
- 絞り込み
シードトレイン・本培養
培養中の抗体産生量を確認し、ハーベスト時期の判断に使われます。
主な用途
- 産生量モニタリング
- ハーベスト判断
- 工程確認
ハーベスト・清澄化
ハーベスト液中の抗体濃度確認に使われます。
主な用途
- ハーベスト液確認
- 抗体濃度
- 回収量
Protein A精製
精製前後の抗体濃度や回収量確認に使われます。
主な用途
- 精製前後の比較
- 回収量確認
- 濃度確認
品質評価・分析
力価・濃度、工程内管理、CQA評価の前処理に関係します。
主な用途
- 力価・濃度
- 工程内管理
- CQA前処理
使用されるモダリティー
Protein A HPLCは、Fc領域を持つ抗体分子で特に使われます。
抗体医薬
関連度高
CHO細胞株培養上清本培養精製工程
IgG抗体の濃度測定に使われる。
二重特異性抗体
関連度高
Fcを持つ二重特異性抗体の産生量確認
Protein A結合性がある場合に使われる。
Fc融合タンパク質
関連度中〜高
Fc領域を持つ融合タンパク質の定量
Protein Aとの結合性に応じて使われる。
抗体フラグメント
関連度低〜中
FabscFvVHH
Fcを持たない場合はProtein A HPLCには向かないことが多い。
組換えタンパク質
関連度低〜中
Fcタグ付きタンパク質
FcタグやProtein A結合性がある場合に限られる。
ワクチン
関連度低〜中
通常は限定的
抗体そのものの製造でない限り中心的ではない。
細胞治療・再生医療
関連度低〜中
通常は限定的
抗体やFc融合タンパク質を測る場合に限られる。
mRNA医薬・LNP
関連度低〜中
通常は限定的
mRNA工程では中心的な測定ではない。
メーカー製品
AgilentBio-Monolith Protein AProtein Aモノリスカラム。mAb力価測定や小量精製に使われ、HPLC/UHPLCシステムと組み合わせられる。公式URL Thermo Fisher ScientificMAbPac Protein A HPLC Columnモノクローナル抗体の高速な力価分析向けProtein A HPLCカラム。培養上清中のmAb定量に使われる。公式URL Tosoh BioscienceTSKgel Protein A-5PW抗体の迅速分離・定量向けProtein Aカラム。細胞培養液中のIgG定量に使われる。公式URL CytivaHiTrap Protein A HPProtein A Sepharose High Performanceを充填したプレパックカラム。抗体精製や小スケール確認に使われる。公式URL WatersProtein A affinity columns / BioResolve関連製品バイオ医薬品分析や抗体定量ワークフローで使われるProtein A関連カラム。公式URL ShimadzuHPLC / UHPLCシステムProtein Aカラムと組み合わせて抗体濃度測定に使われるHPLC/UHPLCシステム。公式URL Agilent1260 / 1290 Infinity Bio-inert LCバイオイナート流路を備えたLCシステム。Protein Aカラムによる抗体定量に組み合わせられる。公式URL
