選び方 — Antibody Purification
抗体精製クロマトグラフィーの選び方
捕捉から研磨まで、どのレジンを・なぜ選ぶか?
抗体のダウンストリームは、プロテインAで捕捉し、イオン交換や疎水などで研磨(ポリッシュ)して不純物を分ける流れが定番です。各段でどのカテゴリのレジンを見るか、なぜその順番か、そしてどの分析で純度を確かめるかを、意思決定の順路として整理します。
抗体(mAb)の精製は、捕捉(キャプチャー)→ 中間・仕上げ(ポリッシュ)という段階で組み立てます。プロテインAで一気に純度を上げ、その後のイオン交換や疎水クロマトで、凝集体・宿主細胞タンパク質(HCP)・電荷異性体などの残りを削っていく——各段は目的が違うので、レジンも分けて選びます。
選ぶときに見る軸
工程の段階捕捉(プロテインA)か、研磨(AEX/CEX/HIC/マルチモーダル)か。段階で見るカテゴリが変わる。
分ける相手凝集体・HCP・電荷異性体・DNA・浸出プロテインAなど、落としたい不純物で手法を選ぶ。
結合モードフロースルー(目的物は素通し、不純物を捕まえる)か、結合・溶出か。
生産性動的結合容量(DBC)・流速・耐アルカリCIP性・寿命。連続化(マルチカラム)の可否。
選択肢と、なぜそれを選ぶか
抗体のFc領域に特異的に結合するプロテインAは、1ステップで高い純度と回収を得られる捕捉の主役。Fcを持たないフラグメントなどにはプロテインL/Gが候補になります。
注意:溶出は酸性のため、直後の低pHウイルス不活化や、浸出プロテインAの管理を工程で織り込みます。
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中性〜弱塩基性条件で、負に帯電したDNA・一部HCP・ウイルスを捕まえ、目的の抗体は素通し(フロースルー)させる研磨の定番。メンブレン型なら高流速で使い捨てやすいのも利点です。
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結合・溶出モードで、凝集体や電荷異性体、残ったHCP・浸出プロテインAを分離する仕上げの要。プロテインA後の中間研磨としても、最終研磨としても使われます。
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疎水性相互作用(HIC)やマルチモーダル(複数の作用を併せ持つ)レジンは、イオン交換だけでは分けきれない凝集体や近接不純物を、別の物差しで削るための選択肢です。
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サイズ排除(SEC)は分子の大きさで分ける手法。分取では収量とのバランスから限定的に使われますが、凝集体の確認・仕上げの選択肢として押さえておきます。
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深掘り抗体医薬の製造工程(解説)→各カテゴリのメーカー・製品はカタログから表示しています。仕様の確認や見積は、各メーカーの製品ページ(外部)でご確認ください。