知っておきたいこと
LPSの研究から生まれた会社
自然免疫応用技研は2006年7月、香川県高松市で設立されました。資本金は4,000万円です。LPS（リポ多糖）の免疫を活性化する作用を30年以上研究してきた経験をもとに、LPSの原料をつくり、バイオ系の試験を受けています。2007年7月には、高松市保健所に衛生検査所として登録しました。
受託の実績は、2020年12月時点でLPS関係の試験が250件以上、自然免疫系の試験が100件以上、ELISAが800件以上です。メニューにない試験や、どの試験をすべきか決まっていない段階の相談も受けています。
リムルス法で測るLPS
LPS測定では、サンプルからLPSを抽出し、リムルス法の比色法か濁度法で測ります。対象は水、細菌、土壌、野菜・穀類、食品、血液などです。パントエア菌のLPSは、特異的なモノクローナル抗体を使うELISAで測ります。検体にリムルス反応を阻害する物質があれば、それを確かめる試験もできます。
LPSの抽出・精製では、グラム陰性菌からウェストファール法、トリクロロ酢酸法、フェノール・クロロホルム法で取り出します。必要に応じてDNA・RNAやタンパク質を除き、トリシンSDS-PAGEで分子量も測ります。
自然免疫を測る細胞試験
細胞試験は、自然免疫を担う細胞の反応を指標にします。
| 試験 | 使う細胞と測り方 |
|---|---|
| サイトカイン産生 | マクロファージ細胞株の上清を市販ELISAキット、またはRNAのPCRで測定 |
| NO産生 | RAW264.7、NR8383、J774.1の上清をGriess試薬で測定 |
| 貪食 | マクロファージ細胞株に蛍光ラテックスビーズを加える |
| NK活性 | KHYG-1（ヒトNK細胞）とカルセインAM標識K562を4時間共培養 |
LPSを含む検体では、ポリミキシンBの有無で比べる測定を勧めています。LPSの作用を除きたいときは、TLR4欠損マウス（C3H/HeJ）の腹腔マクロファージを使います。
LPSの混入を確かめたうえで、自然免疫の活性を測る組み立てです。
マウスを使う試験と納期
動物試験では、C57BL/6マウスに検体を投与し、脾臓細胞とカルセインAMで標識したYac-1を共培養してNK活性を見ます。パイエル板細胞の培養上清のIgAや、骨髄から分化させた樹状細胞のIFN-αは、ELISAで測ります。担癌マウスの抗腫瘍効果、I型アレルギー、2型糖尿病のモデルも受けます。
納期は、細胞試験が細胞・検体・試薬がそろってから約1か月、動物試験が1〜1.5か月です。血清のDAO活性は、検体到着から2〜4週間で報告します。