用語集
「IVT」とは？
別名・英語表記：in vitro転写
鋳型から試験管内でmRNAを合成する反応で、副生成物として二本鎖RNAが生じる。
別名・英語表記：in vitro転写
鋳型から試験管内でmRNAを合成する反応で、副生成物として二本鎖RNAが生じる。
IVT（in vitro転写）は、鋳型・酵素・基質・補因子を試験管内でそろえることでmRNAを合成する反応です。目的の一本鎖RNAと同時に二本鎖RNA（dsRNA）が必ず副生するため、収率だけでなく品質面の管理も求められます。dsRNAは自然免疫刺激を引き起こす不純物となることから、IVT単体の最適化にとどまらず、鋳型設計・キャッピング・下流精製と一体で対処する必要があります。
IVT反応は、鋳型・酵素・基質・補因子という4要素がそろって初めて成立します。収率と品質を高める作業は、これらのバランスを整える作業にほかなりません。また、この反応はキャッピングや下流精製と切り離して単独で最適化することができず、「収率と品質を作り込む起点だが、鋳型設計・キャッピング・下流精製と一体でしか最適化できない」というのが実務上の大前提です。どの要素に手を入れるときも、工程全体への波及を見越した設計が求められます。
IVTでmRNAを合成すると、鋳型非依存の伸長や自己プライミングに由来するわずかなdsRNAが必ず副生します。dsRNAは自然免疫刺激を引き起こす不純物として扱われるため、その低減は重要な課題です。鋳型プラスミドの精製・処理がIVT反応でのdsRNA生成を抑えるという報告があり、鋳型側の管理が下流の品質に波及することが示されています。また、修飾ヌクレオチドの使用がIVT時のdsRNA生成そのものを抑える方向に働くという報告もあり、鋳型設計・原料選択・精製工程の各段階が品質に直結します。
IVTの鋳型として使うプラスミドは、スーパーコイル体・オープンサーキュラー体（OC体）・直鎖体などの異性体が混在した状態で得られます。ニックが入ったOC体や直鎖体、多量体は不純物として扱われ、IVT鋳型としての性能に直接響くとされています。後工程であるIVTが要求する品質から鋳型グレードを逆算して選ぶことが、実務的なアプローチです。鋳型の品質管理はIVT反応の品質管理と表裏一体であり、上流の判断が最終的なmRNAの収率と純度を左右します。
この定義はProglenth編集部が一般的・基礎的な内容として整理したものです。実際の管理基準・要件は製品・企業・各極の規制により異なります。 正確な運用は各極の薬局方・ガイドライン（ICH／GMP等）やメーカーの一次情報をご確認ください。