用語集
「逆相HPLC」とは？
別名・英語表記：逆相クロマトグラフィー
疎水性の差でペプチドやオリゴを分離する液体クロマトグラフィーのこと。
別名・英語表記：逆相クロマトグラフィー
疎水性の差でペプチドやオリゴを分離する液体クロマトグラフィーのこと。
疎水性の強さの差を利用して、ペプチドやオリゴなどの分子を分離する液体クロマトグラフィーの一手法です。医薬品の製造精製から品質試験まで幅広く使われており、わずかな構造の違いを見分ける分解能の高さが実務上の鍵になります。
逆相HPLCは、製造段階の精製と品質試験の分析という、異なる二つの場面で活躍します。精製の文脈では、全長・正配列・正しい側鎖を持つ目的物をほかの類縁物質から取り出す主役として、分取（プレパラティブ）逆相HPLCが位置づけられます。一方、分析の文脈では、類縁物質をピーク面積百分率（area%）で相対量として把握するための手段として用いられ、強制分解試験で分解物を見分ける力を担保したり、安定性試験で経時変化を追ったりするために運用されます。同じ原理を分析にも分取にも使える点が、この手法の実用上の強みです。
逆相HPLCをベースに、イオン対試薬を組み合わせて分離能を高めたのがイオン対逆相HPLC（IP-RP-HPLC）です。鎖長のわずかな違いを高い分解能で分けたいという場面に応える手法として位置づけられており、オリゴ核酸では二本鎖と一本鎖という構造の差を利用した除去にも応用されます。mRNA分析では、このIP-RPを軸に詳細な純度プロファイルを追う用途でも使われており、直交法として別の分析と組み合わせ、両者を突き合わせて分子像を描くアプローチが定石とされています。
逆相クロマトグラフィーでの分離は、分子の疎水性の強さに応じた保持のされやすさの違いを利用しています。そのため、分子に疎水性の高い長鎖脂肪酸が付くといった修飾が加わると、親水性・疎水性のバランスが大きく変わり、保持挙動も変化します。この性質は、修飾の有無や修飾の種類を分析で区別する手がかりになる反面、目的物と類似した疎水性を持つ不純物との分離が難しくなる場合もあり、分析法の開発においてどこまで分け切れるかが重要な検討点になります。
この定義はProglenth編集部が一般的・基礎的な内容として整理したものです。実際の管理基準・要件は製品・企業・各極の規制により異なります。 正確な運用は各極の薬局方・ガイドライン（ICH／GMP等）やメーカーの一次情報をご確認ください。