工程1：宿主・コンストラクト設計
◇ 分岐糖鎖不要なFabを大腸菌で安価に作り、鎖間ジスルフィドを正しく組ませる発現様式の選択。
基準法E. coli ペリプラズム分泌発現
哺乳類細胞・scFv-Fc／Fc融合フラグメントでは
CHO等の哺乳類細胞を宿主とし、シグナルペプチド付きscFv-Fc／Fc融合コンストラクトを培養上清へ分泌発現させる設計
Standard Process Map抗体医薬
抗体フラグメント製造 基準工程マップ
この基準工程マップは、抗体フラグメント（Fab・scFv・VHHなど）の製造と分析を、発現→精製→製剤→品質特性解析の順に整理しています。最適な手法は形式・発現宿主（大腸菌か哺乳類か）・半減期設計で変わるため、各工程に代替・補完法も併記しています。
製法の条件で切り替える
◇の付いた8工程は、この条件で基準法が変わります。
全体像
工程名を押すと、その工程の説明へ移ります。工程を押すと、その場で詳しい説明が開きます。◇は条件で基準法が変わる工程です。
製法の条件で切り替える
◇の付いた8工程は、この条件で基準法が変わります。
細胞構築・発現（1工程）
培養・産生（1工程）
工程2：本培養・発現誘導
◇ 分岐高密度まで増やしてから誘導し、早期溶菌とプロテアーゼ分解を抑えて収量と品質を両立させる運転管理。
基準法規定培地によるフェドバッチ高密度培養
哺乳類細胞・scFv-Fc／Fc融合フラグメントでは
化学的に規定された培地でのCHOフェドバッチ培養（例：37℃・8% CO₂・振盪／撹拌懸濁）
回収・清澄化（2工程）
工程3：菌体回収・ペリプラズム抽出
◇ 分岐蓄積した目的物の遊離法を誤ると宿主タンパク・DNAが混入し後段精製負荷が跳ね上がるため。
基準法遠心による菌体回収 → ペリプラズム抽出（浸透圧ショック／熱抽出）→ 遠心・デプスろ過で清澄化
哺乳類細胞・scFv-Fc／Fc融合フラグメントでは
目的物は培養上清に分泌されるため、浸透圧ショック／熱抽出によるペリプラズム遊離は行わない
工程4：清澄化・デプスろ過
濁った抽出液は樹脂目詰まりを起こすため、捕捉前に清澄化が必須
基準法ディスクスタック遠心後のデプスろ過（グレード密度＋珪藻土含有メディア）
精製（3工程）
工程5：キャプチャー
◇ 分岐Fc非保有のFabを軽鎖/CH1で特異捕捉し、宿主不純物・DNA・エンドトキシンを一段で除く。
基準法軽鎖/CH1ドメイン特異的アフィニティクロマトグラフィー（Fab捕捉）
哺乳類細胞・scFv-Fc／Fc融合フラグメントでは
Fc領域を介したProtein A（または改良型Protein A）アフィニティクロマトグラフィーで一段捕捉する
工程6：可溶化したフラグメントの天然構造へ
◇ 分岐変性状態のフラグメントを正しい立体へリフォールディングしなければ結合活性が出ず、凝集と競合する条件設計が収率を左右。
基準法段階的脱変性＋酸化還元リフォールディング
哺乳類細胞・scFv-Fc／Fc融合フラグメントでは
CHOの分泌（小胞体）経路が酸化的環境を提供し、ジスルフィド結合は発現中に正しく形成されるため、段階的脱変性＋酸化還元リフォールディングは実施しない
工程7：ポリッシング
捕捉後に残る凝集体・宿主タンパク・変異体を電荷差で除き医薬品グレード純度に仕上げる工程。
基準法陽イオン交換
化学修飾（1工程）
工程8：PEG化・修飾
◇ 分岐小型Fabは腎排泄が速く、ヒンジCysへのPEG部位特異結合で滞留を延ばし投与頻度を下げる。
基準法ヒンジ遊離チオール（システイン）への部位特異的マレイミドPEG化
哺乳類細胞・scFv-Fc／Fc融合フラグメントでは
Fcドメインを介したFcRnリサイクルにより血中半減期を確保するため、ヒンジ遊離チオールへの部位特異的マレイミドPEG化は行わない
精製（2工程）
工程9：ウイルス不活化・バイオバーデン低減ろ過
大腸菌系最大の安全性課題であるエンドトキシンを規格まで落とし、ろ過で微粒子・微生物を除く。
基準法AEX／メンブレンアドソーバによるエンドトキシン・DNA低減 ＋ 0.2 µmバイオバーデン低減ろ過
工程10：ウイルス除去ろ過
原料・工程由来の外来性ウイルスをサイズ排除で除去する別の原理の工程
基準法小孔径ウイルス除去フィルターによるサイズ排除ナノろ過（プレフィルター併用）
製剤・充填（2工程）
品質特性・分析（6工程）
工程13：同定・質量分析
◇ 分岐インタクト質量とペプチドマッピングで分子量・全配列・PTMを確認しロット間同一性を担保。
基準法インタクト質量分析
哺乳類細胞・scFv-Fc／Fc融合フラグメントでは
インタクト質量分析に加え、N297近傍のFc N型糖鎖プロファイル評価を追加する
工程14：サイズバリアント・SEC
免疫原性に直結する凝集体含量とモノマー純度を測り規格内をロットごとに確認するCQA測定。
基準法サイズ排除クロマトグラフィー（SEC-HPLC/UPLC）によるサイズバリアント定量
工程15：純度・CE-SDS
重鎖断片と軽鎖のジスルフィド結合が正しく組まれ遊離鎖・断片が無いかを定量する鎖完全性評価。
基準法CE-SDS（キャピラリーゲル電気泳動、非還元＆還元）
装置CE-SDS試薬還元剤・アルキル化剤
工程16：電荷バリアント・icIEF
◇ 分岐脱アミド等が変える電荷を等電点で分離定量し、酸性・塩基性ピークのロット間安定性を確認。
基準法イメージドキャピラリー等電点電気泳動（icIEF）
装置icIEF試薬両性担体・pIマーカー
哺乳類細胞・scFv-Fc／Fc融合フラグメントでは
icIEF／CEXによる電荷バリアント評価の主たる管理対象が、脱アミド化等に加えてシアル酸付加などの糖鎖由来電荷種やC末端リジン残存・N末端ピログルタミン化へ広がる
工程17：結合活性・力価
標的への結合速度論を測り効く分子かを機能面で証明する、出荷判定に必須の力価試験。
基準法表面プラズモン共鳴（SPR）による結合速度論／相対力価測定
工程18：残存不純物・品質管理
大腸菌由来の残存HCP・DNA・エンドトキシンと無菌性を高感度で定量し患者安全を担保。
基準法HCP-ELISA
公開情報にもとづく一般的な整理です。実際の構成は条件により異なります。