シリーズ全12本・合計 約71分

mRNAをどう作るか

鋳型のDNAからmRNAを合成し、キャップを付け、副生物を落とすまでの工程と、そこで品質が決まる場所が分かります。

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  1. 入門この分野がはじめての人は、ここから読んでください。
  2. mRNA-LNPの製造工程とは?IVTから脂質ナノ粒子・無菌充填までmRNA-LNPの製造工程とは?IVTから脂質ナノ粒子・無菌充填までmRNA-LNPの製造工程とは、試験管の中(in vitro)でmRNAを合成する前半と、そのmRNAを脂質ナノ粒子(LNP)に包む後半の2本柱からなる工程です。1本目・約5分
  3. 基本仕組みと決まりを、ひとつずつ説明します。
  4. プラスミド直鎖化とIVT:切る場所がmRNAの終わりを決めるプラスミド直鎖化とIVT:切る場所がmRNAの終わりを決めるmRNAの3′末端は、設計図のどこにも「ここで終われ」と書かれていません。DNAの鋳型が途切れた場所で、RNAポリメラーゼが止まるだけです。2本目・約6分
  5. N1-メチルシュードウリジン(m1Ψ)とは?mRNAで全置換する理由N1-メチルシュードウリジン(m1Ψ)とは?mRNAで全置換する理由ファイザー/ビオンテックとモデルナの新型コロナワクチンは、mRNAに含まれるウリジンを、すべてN1-メチルシュードウリジン…3本目・約6分
  6. mRNAのキャッピングとは?付け方の違いと「効率95%」の読み方mRNAのキャッピングとは?付け方の違いと「効率95%」の読み方mRNAの先頭にキャップが付いているのに、働かない分子があります。昔のキャップアナログ(キャップの代わりに転写の反応液へ加える試薬)では…4本目・約6分
  7. mRNAのdsRNAはなぜできるのか:副生の仕組みと困る場面、測り方mRNAのdsRNAはなぜできるのか:副生の仕組みと困る場面、測り方修飾ヌクレオシドを入れたmRNAでも、IVT(試験管内転写)でつくったままのものを細胞に入れると、インターフェロンなどの炎症反応が出て、タンパク質の産生も伸びません。5本目・約6分
  8. 実務現場で迷う判断と、確かめる手順を説明します。
  9. T7 IVTの収率と品質は何で決まる?酵素より先に見る4点T7 IVTの収率と品質は何で決まる?酵素より先に見る4点mRNAの試験管内転写(IVT)で収率と品質を決めるのは、酵素の銘柄より先に反応の設計です。6本目・約6分
  10. CleanCap共転写キャッピングの選び方:開始配列と供給を先に確かめるCleanCap共転写キャッピングの選び方:開始配列と供給を先に確かめるmRNAのキャップは、転写が終わってから酵素で付けるのが、長く定番の方法でした。その酵素反応と、反応のあとの精製を、転写と同時にまとめて済ませられたら…7本目・約6分
  11. mRNAのdsRNAを落とす:セルロースと逆相クロマトの使い分けmRNAのdsRNAを落とす:セルロースと逆相クロマトの使い分けN1-メチルシュードウリジン(m1Ψ)を使ったmRNAなら、免疫原性は抑えられている。開発の現場でよく聞く前提ですが、2019年の実験は違う結果を出しました。8本目・約6分
  12. オリゴdTアフィニティでmRNAを精製:結合容量の読み方と落ちないものオリゴdTアフィニティでmRNAを精製:結合容量の読み方と落ちないものIVTの反応液には、素性のまるで違うものが混ざっています。転写に使った酵素はタンパク質、未反応のNTPは低分子、鋳型のプラスミドはDNA…9本目・約7分
  13. IVT後の鋳型DNAを消す:DNase IとPlasmid-Safeの使い分けIVT後の鋳型DNAを消す:DNase IとPlasmid-Safeの使い分けmRNAワクチンの最初の審査で、欧州医薬品庁(EMA)は、鋳型DNAを分解するDNase処理の頑健性は、包括的に示されたとは言えないと評価しました。10本目・約6分
  14. 自己増幅型mRNA(saRNA)とは?通常のmRNAとの違いと製造の難所自己増幅型mRNA(saRNA)とは?通常のmRNAとの違いと製造の難所自己増幅型mRNA(saRNA)は、目的の抗原の設計図に加えて、RNAを写し取る複製酵素(レプリカーゼ)の設計図まで持たせたmRNAで、細胞の中で自分を増やします。11本目・約5分
  15. 環状RNA医薬:長持ちの理由と、作るときに残る三つの課題環状RNA医薬:長持ちの理由と、作るときに残る三つの課題RNAの両端をつないで環にするだけで、細胞の中で長持ちし、免疫の警報装置にも引っかかりにくくなる。12本目・約6分

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