LRVは工程ごとに足していい？足せる行と外す行

ウイルスクリアランス試験規制当局への申請を支えるために、製造工程の各工程でウイルス除去・不活化能力を定量的に評価・文書化する一連の試験。詳しく →の報告書では、精製の工程ごとに LRV（対数減少値）が並び、その下に合計が書かれます。この合計を読んで工程のウイルス安全性を判断する人にとって、どの行を足してよいかは結論を左右します。

ただし、行を全部足せばよいわけではありません。止め方が同じ工程の行や、小さすぎる行を足すと、合計は実力より大きく見えます。

足し算が成り立つ理由から始めると、外す行と割り引いて読む行がどれかも、ICH Q5A(R2)細胞株由来のバイオ医薬品について、ウイルス安全性評価の枠組みを示すICHガイドライン。詳しく → の書き方と合わせて見分けられます。

1. LRVは「何桁減ったか」の数字なのに、なぜ足し算で合計できるのか

LRV は「何桁減ったか」を表す数字なので、工程を続けて通したときの減り方は、桁数を足せば求められます。 液の量を掛けたウイルスの総量が、工程の前後で10の何乗分の1に減ったかの乗数がLRVです。

説明用の仮の数字で考えます。1段目でウイルスが1万分の1（10の4乗分の1）に減り、2段目でさらに1,000分の1（10の3乗分の1）に減れば、全体では1,000万分の1です。LRV で書くと、4と3を足して7です。

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ただし、ここには前提があります。1段目をすり抜けたウイルスが、2段目では1段目と関係なく、同じ割合で減ること。この前提が崩れると、足した数字は実際の減り方より大きくなります。では、どの工程どうしならこの前提が成り立つのか。

LRV の数え方そのもの（総量で数えること、スケールダウンモデルで測ること）は、ウイルスクリアランスとはで説明しています。

2. 重要：止め方が同じ工程の行を足すと、なぜ合計が実力より大きく見えるのか？

1段目を生き延びたウイルスは、同じ止め方の2段目にも強い可能性が高いからです。 2段目は1段目と関係なく減るという前提が、ここで崩れます。

たとえば、酸で不活化する工程を2回続けても、1回目で壊れなかったウイルスは2回目でも壊れにくいままです。ICH医薬品規制の国際調和を目的として、日米欧の規制当局と製薬業界が参加する国際的なガイドライン策定機関。詳しく → Q5A(R2) は、不活化の速さが最初は速く、あとで遅くなることがよくあり、最初の工程を逃れたウイルスは次の工程にも強い場合があるとしています。塊になったウイルスは、いろいろな化学処理や加熱に耐えることがあるとも書いています。

止め方が違えば、どうか。前提は成り立ちやすくなります。抗体の精製で言えば、低pH処理は酸でウイルスを包む脂質の膜（エンベロープ一部のウイルスが持つ脂質の外膜。レンチウイルスではVSV-Gなどをまとうが、温度・剪断・凍結融解に弱い。詳しく →）を壊して感染力を奪い、ウイルスろ過は大きさで物理的に止めます。酸に強かったウイルスでも、膜の孔より大きければ止まります。

ICH Q5A(R2) の書き方は、次のとおりです。

• 推奨⁠：製品を損なわず実施できる場合は、作用の仕方が補い合う2つの工程を置き、そのうち1つは膜を持たないウイルスにも効く工程にすることを推奨しています（6.3）。
• 過大評価のおそれ⁠：似た不活化の仕組みの工程の値を足すと、全体の除去を過大に見積もるおそれがあるとしています（6.4）。
• 繰り返し⁠：同じか、ほぼ同じ手順を繰り返した値を合計に入れるなら、その根拠を示すべきとしています（6.4）。

同じ原理の行を合計に入れることは、禁止ではありません。⁠似た仕組みの行は合計を過大に見せるおそれがあり、同じ手順を繰り返した行を入れるなら、その根拠を示すべきとされています。 根拠の無い報告書なら、どちらか1行だけを数えた合計でも安全性を説明できるかを見ます。

3. 膜を持つウイルスと持たないウイルスで、合計はなぜ違う数字になるのか

工程ごとに、効くウイルスと効きにくいウイルスがあるからです。 LRV は、試験に使ったウイルスごとに測るので、合計もウイルスごとに出します。

ICH Q5A(R2) は、溶媒・界面活性剤処理や低pHでの保持のような工程が、膜を持つ幅広いウイルスの除去に実績があるとしています。一方、パルボウイルスエンベロープを持たない極めて頑健な小型ウイルス。化学処理に強く、除去はサイズ排除のろ過が有効。詳しく →のような膜を持たない小さなウイルスは、化学的な処理に強いモデルウイルスとして試験に使われます。

図の右の列を見てください。膜を持たないウイルスでは、低pH処理の行はほとんど数字になりません。そこで合計を支えるのは、大きさで止めるウイルスろ過や、クロマトグラフィー固定相と移動相の間での物質の相互作用（分配・吸着・イオン交換など）の差を利用して、混合物中の成分を分離・精製する操作の総称。詳しく →の行です。

報告書に合計欄が1つしか無いときは、それがどのウイルスの合計なのかを先に確かめます。膜を持つウイルスの合計が大きくても、膜を持たないウイルスの合計が同じだけあるとは限りません。

4. 1未満の行は外し、「以上」の行を含む合計は下限として読む

1 log10 未満の行は、根拠が無ければ合計から外し、「以上」と書かれた行を含む合計は、実力の下限として読みます。

1 log10 未満の行

ICH Q5A(R2) は、ウイルスの量の1 log10 未満の低減は無視できるとみなし、根拠を示さない限り数えないとしています（6.3）。小さな低減の値をいくつも足すと、本当の除去の力を過大に見積もるおそれがあり、そうした足し算はすべきでないとも書いています（6.4）。

1 log10 は10分の1。小さな行を3つ足して2.4のような数字を作っても、それは工程の力を示したことになりません。⁠合計を読むときは、まず1未満の行が入っていないかを見ます。

「以上」と書かれた行

工程の出口でウイルスが見つからなかったとき、LRV は実際の値ではなく、試験で検出できる下限から計算した「○以上」で書きます。1行でも「以上」が混ざれば、合計も「以上」の数字です。

その上限を決めるのは、試験で加えたウイルスの量です。加えた量が違う2つの報告書の「以上」の合計は、大きいほうが高性能とは読めません。上限が何で決まるかは、ウイルス除去フィルターの孔径とLRVで詳しく扱っています。

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外す行と割り引く行が分かったら、残るのは1行ずつの数字そのものが確かかどうかです。凝集したウイルスを加えた試験や、実機と条件のずれたスケールダウンモデルでは、1行の値が実力より高く出ることがあり、ウイルスクリアランスとはの4節と5節で扱っています。

5. 報告書の合計は、どのウイルスの数字かから行ごとに確かめる

最初に確かめるのは、その合計がどのウイルスの数字かです。 次の順に、合計欄ではなく行を1つずつ見ます。

• ウイルスの種類⁠：合計が、膜を持つウイルス（レトロウイルス様粒子CHO細胞などが内在的に持ちうる、レトロウイルスに似た粒子。ウイルス安全性評価の主要な対象になる。詳しく →など）と、膜を持たないウイルス（パルボウイルスなど）のどちらの数字か。ウイルスごとに別々に書かれているか。
• 止め方⁠：足した行の止め方が、不活化と除去のように互いに違うか。同じ原理の行があれば、根拠が示されているか。
• 1未満の行⁠：対数減少値（LRV）工程の前後で不純物やウイルスが何桁減ったかを対数で表す指標。除去能を定量的に示す。詳しく →が1 log10 未満の行が、根拠なしに合計に入っていないか。
• 「以上」の行⁠：どの行が「以上」か。加えたウイルスの量が書かれているか。
• 1行ずつの条件⁠：スケールダウンモデルの滞留時間、pH、伝導度溶液の電気の通しやすさで塩濃度の目安になる指標。クロマトの溶出やプール判定の管理に使う。詳しく →、負荷量が、実機と並べて示されているか。

合計欄の横に、行ごとの「止め方」「ウイルス」「実測値か以上か」を書き足してみると、外すべき行が見つけやすくなります。書けない行があれば、その行を外した合計でも安全性を説明できるかを、試験の委託先や社内の担当と確かめます。

参考文献

• ICH Q5A(R2). Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin. International Council for Harmonisation, 2023.（6.3 補い合う2つの工程の推奨、1 log10 未満の低減の扱い。6.4 似た仕組みの値の足し算と繰り返しの扱い）
• 厚生労働省医薬局医薬品審査管理課長通知「ヒト又は動物細胞株を用いて製造されるバイオテクノロジー応用医薬品等のウイルス安全性評価に関するガイドラインの一部改正について」（医薬薬審発0109第3号、令和7年1月9日）